PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

枯草芽孢杆菌CX37 (Connexin 37) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

耶纳农球菌VLDLR (Very Low Density Lipoprotein Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Agrococcus jenensis

中慢生华癸根瘤菌bTC (Betacellulin) ELISA Kit 用途: 与紫云英共生结瘤固氮

黑曲霉PLAA (Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus niger

近平滑假丝酵母PDH E1 (Pyruvate Dehydrogenase E1) ELISA Kit拉丁属名: Candida parapsilosis

白灵侧耳（白灵菇）AQP-4 (Aquaporin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Pleurotus  nebrodensis

光滑链霉菌SFRP2 (Secreted Frizzled Related Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces levis

土曲霉α-SCA (α-sarcomeric Actin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球孢枝孢Hepc (Hepcidin) ELISA Kit 拉丁属名: Cladosporium sphaerospermum Penz.

海滨适盐菌PAR4 (Protease Activated Receptor 4) ELISA Kit 拉丁属名: Haladaptatus litoreus

秦氏蜜环菌CD40L/TNFSF5 (Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌SPA (Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

斑污拟盘多孔孢β-Lg (β-Lactoglobulin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

小孢根霉华变种CXCR1 (CXC-Chemokine Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus microsporus var. chinensis

枯草芽孢杆菌RBP4 (Retinol Binding Protein 4, Plasma) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis
盖塔病毒探针法荧光定量RT-探针法荧光定量PCR试剂盒说明书B3GALNT1  β1，3半乳糖转移酶3抗体格兰地新groenlandicine中药标准品  分 子 式: C19H16NO4+ 分 子 量: 322.33464

Blood Group Lewis a  血型抗原Lewis A抗体Sorensen磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Cyclophilin F  亲环蛋白（亲环素）PPIF抗体甲基新苦木素16-beta-O-Methylneoquassin化学标准品 分 子 式: C23H32O6 分 子 量: 404.497

DAP3  死亡相关蛋白3抗体獐牙菜苦苷Swertiamarin中药标准品  分 子 式: C16H22O10 分 子 量: 374.34

HAX1  造血干细胞特异性相关结合蛋白1抗体毛果香茶菜醛 ASpiro[cyclohexane-1,4'(3'H)-[1H-7,9a]methanocyclohepta[c]pyran]-2-carboxaldehyde,hexahydro-5'-hydroxy-3,3-dimethyl-8'-methylene-1',9'-dioxo-,(1R,2R,4'aS,5'R,7'S,9'aS)-对照药材 分 子 式: C20H26O5 分 子 量: 346.41744

NS5ATP9/KIAA0101  病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9抗体盐酸乙醇胺溶液(1mol/L,pH8.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MFF  线粒体裂变因子MFF抗体无菌去离子水(For Cell Culture)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: