PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

红色红曲霉ERK2 (Extracellular Signal Regulated Kinase 2) ELISA Kit拉丁属名: Monascus ruber

葡萄座腔菌Sp17 (Sperm Protein 17) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

赖氨酸芽胞杆菌属PLA2G10 (Phospholipase A2, Group X) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus sp.

禾赤镰孢TLR9 (Toll-Like Receptor 9) ELISA Kit用途: 药用植物内生菌

Debaryomyces prosopidisCLDN9 (Claudin 9) ELISA Kit 拉丁属名: Debaryomyces prosopidis

土曲霉PHB (Prohibitin) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus terreus

枯草芽孢杆菌β2-GP1 Ab IgM (β2-Glycoprotein 1 Antibody IgM) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

树舌F13B (Coagulation Factor XIII B Polypeptide) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

饲料类芽孢杆菌ATF-4 (Activating Transcription Factor 4) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus pabuli

慢生根瘤菌CgA (Chromogranin A/Pancreastatin) ELISA Kit用途: 与花生共生固氮良好

香菇ALDH (Aldehyde Dehydrogenase, Mitochondrial) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

ATCC 700324PPAR-γ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit拉丁属名: Klebsiella oxytoca

美澳型核果褐腐病菌VEGFR1/Flt1 (Vascuoar Endothelial Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

截形炭团菌PLA2R1 (Phospholipase A2 Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Hypoxylon truncatum

球孢白僵菌Smad1/MADH1 (Mothers Against Decapentaplegic Homolog 1) ELISA Kit用途: 鳞翅目害虫生物防治
马虻探针法荧光定量PCR试剂盒 DUSP2  双特异性磷酸酶2抗体20-去氧鼠尾草酚20-deoxo-carnosol化学标准品 分 子 式: C20H28O3 分 子 量: 316.435

ETHE1  乙基丙二酸脑病蛋白抗体榴花碱Conopharyngine对照药材 分 子 式: C23H30N2O5 分 子 量: 414.4947

GTSE1/G2 and S phase expressed 1  G2期/S期应答相关蛋白1抗体15-羟基松香酸15-Hydroxydehydroabietic acid中药标准品  分 子 式: C20H28O3 分 子 量: 316.43452

HIPK4  同源相互作用蛋白激酶4抗体二十二烷n-Docosane化学标准品 分 子 式: C22H46 分 子 量: 310.60

AMBRA1  自噬相关基因AMBRA1抗体哌嗪异黄酮Scandine中药标准品  分 子 式: C17H25NO4.HCl 分 子 量: 343.84564

IBRDC2/RNF144B  E3泛素蛋白连接酶144B抗体（环指蛋白144B）非洲防己碱Columbamine中药标准品  分 子 式: C20H20NO4 分 子 量: 338.38

JMY  连接介导调节蛋白抗体补骨脂查尔酮2-Propen-1-one,1-[2,4-dihydroxy-5-(3-methyl-2-buten-1-yl)phenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)-, (2E)-中药标准品  分 子 式: C20H20O4 分 子 量: 324.3704