PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

土壤成对杆菌MSTN (Myostatin) ELISA Kit拉丁属名: Dyadobacter  soli

球毛壳SST (Somatostatin) ELISA Kit 拉丁属名: Chaetomium globosum

炭疽脏器抗原（液体）GDF2 (Growth Differentiation Factor 2) ELISA Kit 规格: 10ml

假单胞菌属CKMB (Creatine Kinase MB Isoenzyme) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  sp.

褐顶环柄菇ENA-78 (Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大豆  大豆转基因成分（阳性） PKCη (Protein Kinase C Eta ) ELISA Kit拉丁属名: 大豆  大豆转基因成分（阳性）

酿酒酵母PGF (Prostaglandin F) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

土壤三线镰孢C3a (Complement Component 3a) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉SOD3 (Superoxide Dismutase 3, Extracellular) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肥蘑菇CYPA (Cyclophilin A) ELISA Kit用途: 食用

ArthrobacterRPA-70 (replication protein A) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter dextranolyticus

大肠埃希菌FGFR1 (Fibroblast Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: coli

糙孢蓝状菌LIPF (Lipase, Gastric) ELISA Kit拉丁属名: Talaromyces trachyspermus

粘状曲霉MUC6 (Mucin 6) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus pulverulentus

米曲霉CX31 (Connexin 31) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus oryzae
鸭源鸡杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书RNF7/CKBBP1  环指蛋白7抗体牡荆素Vitexin中药标准品  分 子 式: C21H20O10 分 子 量: 432.38

RPS3  核糖体蛋白S3抗体代谢性骨疾病固定液(pH7.35)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

RRAGC  RAS相关GTP结合蛋白C抗体缬草三酯Valtrate中药标准品  分 子 式: C22H30O8 分 子 量: 422.4688

SAA4/Serum amyloid A 4 protein  血清淀粉样蛋白4抗体南五味子酸1H-Benz[e]indene-6-propanoic acid,3-[(1R,4Z)-5-carboxy-1-methyl-4- hexenyl]-2,3,3a,4,6,7,8,9,9a,9b-decahydro-3a,6,- 9b-trimethyl-7-(1-methylethenyl)-,(3R,3aR,- 6S,7S,9aR,9bS)- 对照药材 分 子 式: C30H46O4 分 子 量: 470.68384

RRAS  原癌基因R-Ras抗体伊贝碱苷A;辛贝甲素-3-D-葡萄糖苷化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

SEC14 like protein 2/Squalene transfer protein  α维生素E相关蛋白抗体L-异亮氨酸L-Isoleucine化学标准品 分 子 式: C6H13NO2 分 子 量: 131.17292

SEN1/  细胞衰老相关蛋白1抗体异噁酰草胺Benzamide,N-[3-(1-ethyl-1-methylpropyl)-5-isoxazolyl]-2,6-dimethoxy-化学标准品 分 子 式: C18H24N2O4 分 子 量: 332.39416