PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

少根根霉GDH/GLDH (Glutamate dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus arrhizus var. arrhizus

虫草MAdCAM1 (Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄曲霉SEMA7A (Semaphorin 7A) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  flavus

松果链霉菌ETRB (Endothelin Receptor B) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces carpinensis

黑马朗假丝酵母IL-11 (Interleukin 11) ELISA Kit拉丁属名: Candida haemulonii

大肠埃希氏菌LAB7-2/CD86 (B-Lymphocyte Activation Antigen B7-2) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

间型假丝酵母MYBPC3 (Myosin Binding Protein C, Cardiac) ELISA Kit拉丁属名: Candida intermedia

雷丸菌Surv (Survivin) ELISA Kit拉丁属名: Laccocephalum mylittae

苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种UBE2C (Ubiquitin Conjugating Enzyme E2C) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus thuringiensis subsp. galleriae

枯草芽孢杆菌MRC2 (Mannose Receptor C Type 2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

石楠炭疽病菌F9 (Coagulation Factor Ⅸ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白假丝酵母STAT4 (Signal Transducer and Activator of Transcription 4) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

蜡样芽胞杆菌MAPK (Mitogen Activated Protein Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus cereus

黑曲霉TEP1 (Telomerase Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

三叶草根瘤菌OTF2B (Octamer Transcription Factor 2B) ELISA Kit用途: 与三叶草共生固氮
弗朗西斯菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒规格Adenylate Kinase 1/AK1  腺苷酸激酶-1抗体盐酸胍溶液(8mol/L)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CTNNBIP1  β链接素相互作用蛋白1抗体滇乌头碱yunaconitine化学标准品 分 子 式: C35H49NO11 分 子 量: 659.768

phospho-CTNNBIP1 (Ser36)  磷酸化β链接素相互作用蛋白1抗体大麻酰胺D2,3-Naphthalenedicarboxamide,1,2-dihydro-7-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-N2,N3-bis[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]-6-methoxy-,(1R,2S)-rel-化学标准品 分 子 式: C36H36N2O8 分 子 量:

phospho-CTNNBIP1 (Thr43/Ser50)  磷酸化β链接素相互作用蛋白1抗体西红花苷IITricrocin中药标准品  分 子 式: C37H52O19 分 子 量: 800.797380000001

AKR1D1  醛固酮还原酶家族1成员D1抗体柠檬苦素limonin from citrus seeds中药标准品  分 子 式: C26H30O8 分 子 量: 470.52

ALDH1B1  乙醛脱氢酶5抗体酚酞溶液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ALDOB  醛缩酶2抗体聚谷氨酸紫杉醇CT-2103中药标准品  分 子 式: C47H51NO14.C5H9NO4 分 子 量: 1001.0354