PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

LuteolibacterApoC3 (Apolipoprotein C3) ELISA Kit拉丁属名: Luteolibacter  cuticulihirudinis

小叶相思根瘤菌ANG II (Angiotensin II) ELISA Kit用途: 固氮。

类诺卡氏菌属GTEAGE (Glomerular Tissue Extract Advanced Glycosylation End Products) ELISA Kit拉丁属名: Nocardioides  kribbensis

梭菌属NAGase (N-Acetyl Beta-D-Glucosaminidase) ELISA Kit 拉丁属名: Clostridium sp.

苏云金芽胞杆菌亚毒亚种ADAM10 (A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

丛毛红曲DNase-I (Deoxyribonuclease I) ELISA Kit拉丁属名: Monascus  pilosus

东方伊萨酵母COL3 (Collagen Type Ⅲ) ELISA Kit拉丁属名: Issatchenkia orientalis

酿酒酵母mTOR (Mammalian Target of Rapamycin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

蜡样芽孢杆菌δSIP-α (Delta Sleep Inducing Peptide α) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

 禽病毒MASP1 (Mannan Associated Serine Protease 1) ELISA Kit拉丁属名: Avian leucosis virus

淡紫青霉C/EBPδ (CCAAT/Enhancer Binding Protein, Delta) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium lilacinum Thom

印度芽孢杆菌CNP (C-type Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus indicus

洋葱伯克霍尔德氏菌PHLDA2 (Pleckstrin Homology Like Domain Family A, Member 2) ELISA Kit 拉丁属名: Burkholderia cepacia

绒毛栓菌MUC5B (Mucin 5 Subtype B) ELISA Kit拉丁属名: Trametes pubescens

酮丁梭菌COL15 (Collagen Type XV) ELISA Kit 拉丁属名: Clostridium  acetobutylicum
串珠镰刀菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格BAI2/Brain Specific Angiogenesis Inhibitor 2  脑特异性生成抑制蛋白2抗体雪胆素甲19-Norlanosta-1,5-diene-3,11,22-trione, 16,24-epoxy-2,25-dihydroxy-9-methyl-, (9beta,10alpha,16alpha,24S)-中药标准品  分 子 式: C30H42O6 分 子 量: 498.65088

KLHL20  Kelch样蛋白20抗体开环异落叶松树脂酚Secoisolariciresinol中药标准品  分 子 式: C20H26O6 分 子 量: 362.41684

LECT1  白细胞衍生化学吸引素抗体罗汉果皂苷IVab-D-Glucopyranoside, (3b,9b,10a,11a,24R)-11,25-dihydroxy-9-methyl-19-norlanost-5-ene-3, 24-diyl bis[6-O-b-D-glucopyranosyl-中药标准品  分 子 式: C54H92O24 分 子 量: 1125.29388

Natriuretic Peptide Receptor A  利钠肽受体A抗体连翘酯苷H化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

Ribonuclease Inhibitor  核糖核酸酶抑制因子1抗体戈米辛HDibenzo[a,c]cyclooctene-1,7-diol,5,6,7,8-tetrahydro-2,3,10,11,12-pentamethoxy-6,7-dimethyl-, (6S,7S,12aR)-化学标准品 分 子 式: C23H30O7 分 子 量:

SEMA4A  跨膜蛋白SEMA4A抗体柴胡皂苷B1Saikosaponin B1中药标准品  分 子 式: C42H68O13 分 子 量: 780.99

SPON1/F spondin  细胞外基质底物反应蛋白1抗体乙酸钠溶液(3mol/L,pH5.6,RNase free)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: