PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

围小丛壳扁圆变种PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

栗疫菌PKCβ1 (Protein Kinase C Beta 1) ELISA Kit 拉丁属名: Cryphonectria parasitica

新城疫病毒MAPτ (Microtubule Associated Protein Tau/Tau Protein) ELISA Kit拉丁属名: Newcastle       disease virus

尖镰孢古巴专化型ACTN2 (Actinin Alpha 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

玫瑰色红球菌IL-5 (Interleukin 5) ELISA Kit拉丁属名: Rhodococcus rhodochrous

运动节杆菌GSTα1 (Glutathione S Transferase Alpha 1) ELISA Kit 拉丁属名: Arthrobacter agilis

Rhizobium multihospitiumLMP7/PSMB9 (Low Molecular-weight Protein/proteasome Beta-type Subunit) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus niger

产气荚膜梭菌 毒素D型TFR/CD71 (Transferrin Receptor) ELISA Kit拉丁属名: perfringens Type D

隆纹黑蛋巢NKB (Neurokinin B) ELISA Kit拉丁属名: Cyathus striatus

Rhizobium alkalisoliPPP1R1A (Protein Phosphatase 1 Regulatory Subunit A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

节杆菌NUP188 (Nucleoporin 188kDa) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter psychrochitiniphilus

所多玛盐红菌GAL14 (Galectin 14 ) ELISA Kit 拉丁属名: Halorubrum sod952ense

山梨木糖假丝酵母ADAM8 (A Disintegrin And Metalloprotease 8) ELISA Kit拉丁属名: Candida sorboxylosa

阳极还原地杆菌VIPR1 (Vasoactive Intestinal Peptide Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Geobacter anodireducens
鸡痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒供应商THYN1  胸腺细胞核蛋白1抗体2”-O-没食子酰基金丝桃苷2'-O-Galloylhyperin中药标准品  分 子 式: C30H28O15 分 子 量: 628.53432

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NUPR1/p8  核蛋白p8抗体通用强力抗原修复液(10×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

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PARP3  多腺苷二磷酸多聚酶3抗体/多聚ADP-核糖聚合酶3异类叶升麻苷Isoacteoside中药标准品  分 子 式: C29H36O15 分 子 量: 624.58714

PARP4  多腺苷二磷酸多聚酶4抗体/多聚ADP-核糖聚合酶45-羟色胺酸2-Amino-3-(5-hydroxy-1H-indol-3-yl)propanoic acid中药标准品  分 子 式: C11H12N2O3 分 子 量: 220.22458

DOCK1  细胞质分裂付出蛋白1抗体去芹-桔梗皂苷D3deapioplatycodin D3化学标准品 分 子 式: C58H94O29 分 子 量: 1255.35