PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

斜卧青霉TUBβ (β-Tubulin) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium decumbens

大肠埃希菌LXA4 (Lipoxin A4) ELISA Kit拉丁属名: coli

果蔬汁 三唑磷、、磷、 乙酰磷RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit 拉丁属名: 果蔬汁 三唑磷、、磷、 乙酰磷

细致交链孢PP14 (Placental Protein14) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

热带假丝酵母IRAK3 (Interleukin 1 Receptor Associated Kinase 3) ELISA Kit拉丁属名: Candida tropicalis

大肠埃希氏菌PAI2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2 ) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

木葡萄球菌PSPN (Persephin) ELISA Kit拉丁属名: Staphylococcus xylosus

滑菇PGC (Pepsinogen C) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

浅绿黄假单胞菌CCL14 (Chemokine C-C-Motif Ligand 14) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas viridiflava

蜜二糖假丝酵母RARS (Arginyl tRNA Synthetase) ELISA Kit拉丁属名: Candida melibiosica

黑木耳APAF-1 (Apoptosis Protease Activating Factor-1) ELISA Kit拉丁属名: Auricularia  auricula

枯草芽孢杆菌MPF (Maturation Promoting Factor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

平田头菇6-2ES-Ab (Anti-Endostatin Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

浅灰链霉菌AAA (Anti-Albumin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces griseolus(Waksman) Waksman et Henrici

鸭肝炎病毒FGL1 (Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Duck hepatitis virus
猫病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒说明书HSPBAP1  热休克蛋白27相关蛋白1抗体5-烯丙基-1,2,3-三甲氧基苯5-Allyl-1,2,3-trimethoxybenzene化学标准品 分 子 式: C12H16O3 分 子 量: 208.25364

C12orf23  *2号染色体开放阅读框23抗体细交链孢菌酮酸2H-Pyrrol-2-one,3-acetyl-1,5-dihydro-4-hydroxy-5-[(1S)-1-methylpropyl]-, (5S)-化学标准品 分 子 式: C10H15NO3 分 子 量: 197.231

RUBISCO  核酮糖1,5二磷酸羧化酶抗体去氢松香酸1-Phenanthrenecarboxylicacid, 1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahydro-1,4a-dimethyl-7-(1-methylethyl)-,(1R,4aS,10aR)-中药标准品  分 子 式: C20H28O2 分 子 量:

G6PDH/H6PD  己糖6磷酸脱氢酶抗体4-苯基瑞香素7-甲基醚7-methoxy-8-hydroxy-4-phenylcoumarin化学标准品 分 子 式: C16H12O4 分 子 量: 268.26408

γ-Catenin  γ-连环素/连接蛋白γ抗体S23906-1(±)-cis-1,2-Bis(acetoxy)-6-methoxy-3,3,14-trimethyl-2,3,7,14-tetrahydro-1H-benzo[b]pyrano[3,2-h]acridin-7-one化学标准品 分 子 式: C28H27NO7 分 子 量: 489.52989

Thrap3/TRAP150  甲状腺激素受体相关蛋白3抗体杯苋甾酮Cyasterone中药标准品  分 子 式: C29H44O8 分 子 量: 520.65

PRMT5  组蛋白精氨酸甲基转移酶5抗体α-细辛脑alpha-Asarone化学标准品 分 子 式: C12H16O3 分 子 量: 208.25