PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

硬杆菌CX40 (Connexin 40) ELISA Kit 拉丁属名: Arthrobacter  scleromae

鞘氨菌COL10 (Collagen Type X) ELISA Kit 拉丁属名: Sphingobium  sp.

*灰葡萄孢FGF6 (Fibroblast Growth Factor 6) ELISA Kit 用途: 进行分析检测及抗病性鉴定，指导 。

粪肠球菌C1qR1 (Complement Component 1q Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: faecalis

毛霉属NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit拉丁属名: Mucor  sp.

弓形虫(GJS-3株)C5b (Complement Fragment 5b) ELISA Kit拉丁属名: gondii

北京掷孢酵母GSTs (Glutathione S-Transferases) ELISA Kit拉丁属名: Sporobolomyces beijingensis

盖替隐球酵母Ras-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Cryptococcus gattii

浅灰小双孢菌TNPO1 (Transportin 1) ELISA Kit 拉丁属名: Microbispora griseola

广西腐霉UBAP2 (Ubiquitin Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Pythium guangxiense

黑曲霉IL-13 (Interleukin 13) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

空肠弯曲杆菌EJ/GlyRS (Anti-EJ-Antibody) ELISA Kit拉丁属名: jejuni

近缘毛壳AATF (Apoptosis Antagonizing Transcription Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Chaetomium subaffine

鞘氨杆菌cPLA2 (Cytosolic Phospholipase A2) ELISA Kit拉丁属名: Sphingobacterium  sp.

酿酒酵母BECN1 (Beclin 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
羊阔盘吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商DMTF1  周期素D相互作用蛋白1抗体槲皮素-3-O-β-D-葡糖糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

GMCL1L  生殖细胞样蛋白1样蛋白抗体草质素苷Rhodionin中药标准品  分 子 式: C21H20O11 分 子 量: 448.3769

KLLN   Killin-p53调节复制抑制蛋白抗体四氢鸭脚木碱TETRAHYDROALSTONINE对照药材 分 子 式: C21H24N2O3 分 子 量: 352.42686

HFREP1/FGL1  肝细胞源性纤维蛋白原相关蛋白1抗体D-葡萄糖醛酸(2S,3S,4S,5R)-2,3,4,5-Tetrahydroxy-6-oxohexanoic acid化学标准品 分 子 式: C6H10O7 分 子 量: 194.1394

Fibrinogen gamma chain  人纤维蛋白原γ链抗体EDTA溶液(2%,pH7.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Fibrinopeptide B  纤维蛋白肽B抗体（血纤肽B）塔拉萨敏talatisamine中药标准品  分 子 式: C24H39NO5 分 子 量: 421.57016

Mitochondrial ribosomal protein L11  线粒体核糖体蛋白L11抗体3-羟基-2-甲基-4-吡喃酮3-Hydroxy-2-methyl-4H-pyran-4-one对照药材 分 子 式: C6H6O3 分 子 量: 126.11004