PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

日本曲霉FABP6 (Fatty Acid Binding Protein 6, Ileal) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus japonicus

乳酸乳球菌乳亚种MAPK14 (Mitogen Activated Protein Kinase 14) ELISA Kit拉丁属名: Lactococcus lactis subsp. lactis

酿酒酵母CK-HMW (Cytokeratin High Molecular Weight) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

费氏柠檬酸杆菌HLTF (Helicase Like Transcription Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Citrobacter  freundii

豌豆根瘤菌fFDFT1 (Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA Kit用途: 与蚕豆、豌豆共生固氮

柠檬明串珠菌Apo A1-Ab (Anti-Apolipoprotein A1 antibody) ELISA Kit拉丁属名: Leuconostoc  citreum

贝形侧耳COL1α1 (Collagen Type I Alpha 1) ELISA Kit  用途: 食用

酿酒酵母TrxR1 (Thioredoxin Reductase 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

泡盛曲霉GnRH (Gonadotropin Releasing Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  awamori

黑曲霉CA1 (Carbonic Anhydrase I) ELISA Kit 用途: 柠檬酸深层发酵菌

慢生根瘤菌GROα/CXCL1/NAP3 (Growth Regulated Oncogene Alpha) ELISA Kit用途: 与胡枝子共生固氮

狭截盘多毛孢ELA4 (Elastase 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

解脂假丝酵母FLRT2 (Fibronectin Leucine Rich Transmembrane Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Candida  lipolytica

解蛋白奇异球菌CDK1 (Cyclin Dependent Kinase 1) ELISA Kit拉丁属名: Deinococcus proteolyticus

南极节杆菌ES (Endostatin) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter   antarcticus
丝菌属通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商MALT1  粘膜相关淋巴组织转运蛋白1抗体IPTG(20%,0.8mol/L)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NALP12  NALP12抗体糠酸Furan-2-carboxylic acid中药标准品  分 子 式: C5H4O3 分 子 量: 112.08346

NALP6  富含亮氨酸重复结构域蛋白6抗体盐酸吐根碱2H-Benzo[a]quinolizine,3-ethyl-1,3,4,6,7,11b-hexahydro-9,10-dimethoxy-2-[[(1R)-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxy-1-isoquinolinyl]methyl]-,hydrochloride (1:1), (2S,3R,11bS)-化学标准品 分 子 式: C29H40N2O4.HCl 分 子 量: 517.09984

NLRP7  富含亮氨酸重复结构域蛋白7抗体苯甲酰乌头原碱benzoylaconine化学标准品 分 子 式: C32H45NO10.HBr 分 子 量: 684.61234

NLRP9  富含亮氨酸重复结构域蛋白9抗体对叶百部碱化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

ARMER  ARMER抗体雷公藤酚A24,25,26-Trinoroleana-1,3,5(10),7-tetraen-29-oicacid, 2,3-dihydroxy-9,13-dimethyl-6-oxo-, (9b,13a,14b,20a)-化学标准品 分 子 式: C29H38O5 分 子 量:

HBXIP  病毒X蛋白相互作用蛋白Kodak F-5定影液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: