PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

异常汉逊酵母PC/CPG (Choline Phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁属名: Hansenula  anomala

粟酒裂殖酵母TXLNb (Taxilin Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Schizosaccharomyc pombe

深凹杯伞AMY1 (Amylase Alpha 1, Salivary) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

槐生多年卧孔菌C4a (Complement Component 4a) ELISA Kit用途: 药用。具有，诱导细胞调亡，诱导机体产生多种细胞因子，等作用。

绿色木霉β2-GP1 Ab IgG (β2-Glycoprotein 1 Antibody IgG) ELISA Kit拉丁属名: Trichoderma  viride

鸭疫里氏杆菌GREM1 (Gremlin 1) ELISA Kit 拉丁属名: anatipestifer

皮壳青霉ELMO2 (Engulfment And Cell Motility 2) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium crustaceum

麦根腐平脐蠕孢MAGE (Melanoma-associated Antigen) ELISA Kit用途: 教学科研

大肠杆菌MR (Mannose Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

多主葡萄壳菌PRDX2 (Peroxiredoxin 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

耐寒短杆菌STK39 (Serine/Threonine Kinase 39) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希氏菌PCK1 (Phosphoenolpyruvate Carboxykinase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

中间普氏菌MRP (Multidrug Resistance-Associated Protein) ELISA Kit拉丁属名: Prevola intermedia

平田头菇3-1HSP-60/HSPD1 (Heat Shock Protein 60) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

镰雄腐霉LMWH (Low Molecular Weight Heparin) ELISA Kit拉丁属名: Pythium falciforme
马病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CTAGE5  皮肤T细胞相关抗原5抗体（表达抗原6）9,10-二苯基蒽9,10-Diphenylanthracene 高端化学试剂 分 子 式: C26H18 分 子 量: 330.42112

AGPAT1  溶血磷脂酰基转移酶抗体5-甲基间苯二酚5-Methylbenzene-1,3-diol对照药材 分 子 式: C7H8O2 分 子 量: 124.13722

EBAG9/RCAS1  相关表面抗原RCAS1抗体酸性磷酸酶封闭液(100×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

FAM120C  构成激活过氧化酶活化增生受体γ样蛋白2抗体1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯b-D-Glucopyranoside,[(2R)-2-hydroxy-2-(2-methylpropyl)-1,4-dioxo-1,4-butanediyl]bis(oxymethylene-4,1-phenylene)bis-化学标准品 分 子 式: C34H46O17 分 子 量: 726.71884

MUM1/FLJ14868  突变的相关抗原1抗体茵芋碱Furo[2,3-b]quinoline,4,7,8-trimethoxy-中药标准品  分 子 式: C14H13NO4 分 子 量: 259.25732

FMNL1  成蛋白相关蛋白1抗体黑芥子硫苷酸钾一水b-D-Glucopyranose, 1-thio-,1-[N-(sulfooxy)-3-butenimidate], monopotassium salt, monohydrate, (Z)- (9CI)中药标准品  分 子 式: C10H16NO9S2- 分 子 量: 358.36534

GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7  /睾丸抗原家族4亚型7抗体藤黄占吨酮 E9H-Xanthen-9-one,2-[(2E)-3,7-dimethyl-2,- 6-octadienyl]-3,4,6,8-tetrahydroxy-1-(3- methyl-2-butenyl)- 对照药材 分 子 式:  分 子 量: