PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

新疆盐地杆菌NRIP1 (Nuclear Receptor Interacting Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Salinibacterium     xinjiangense

短杆状马赛菌c-myc (c-myc Oncogene Product) ELISA Kit拉丁属名: Massilia brevitalea

博斯氏菌属Aβ1-42 (Amyloid Beta Peptide 1-42) ELISA Kit拉丁属名: Bosea lathyri

戊糖片球菌CD109 (Cluster of Differentiation 109) ELISA Kit 拉丁属名: Pediococcus  pentosaceus

短小芽胞杆菌CDK2 (Cyclin Dependent Kinase 2) ELISA Kit用途: 分类 研究

枯草芽孢杆菌MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

勒仔树根瘤菌CPP (Copeptin) ELISA Kit用途: 固氮。

微杆菌属AT (AntiThrombin) ELISA Kit拉丁属名: Microbacterium  hatanonis

米曲霉α Manase (α Mannosidase) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus oryzae

ChryseobacteriumDAG1 (Dystrophin Associated Glycoprotein 1) ELISA Kit拉丁属名: Chryseobacterium hispanicum

油菜假单胞菌SYNPO (Synaptopodin) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas brassicacearum

产朊假丝酵母ALDOC (Aldolase C, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit拉丁属名: Candida  utilis

黑曲霉EREG (Epiregulin) ELISA Kit用途: 降解PAH、菲等。

弗兰克氏菌IGF2R (Insulin Like Growth Factor 2 Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

灰葡萄孢（灰霉病菌）8-epi-PGF2α (8-Epi-Prostaglandin F2 Alpha) ELISA Kit用途: 教学科研
马腺病毒探针法荧光定量PCR试剂盒供应商MST4  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶MST4抗体野黑樱苷Benzeneacetonitrile, a-(b-D-glucopyranosyloxy)-, (aR)-对照药材 分 子 式: C14H17NO6 分 子 量: 295.28788

MAP3K14/NFkB Inducing Kinase NIK  丝裂原活化蛋白激酶3K14抗体阿魏酸松柏酯3-(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)allyl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate中药标准品  分 子 式: C20H20O6 分 子 量: 356.3692

Cullin 5/CUL5  加压素激活钙启动受体蛋白1抗体丹参新醌D7H-Phenanthro[3,2-b]pyran-7,12(8H)-dione,9,10-dihydro-8-(hydroxymethyl)-4,8,9-trimethyl-化学标准品 分 子 式: C21H20O4 分 子 量: 336.3811

AQP8/Aquaporin 8  水通道蛋白8抗体左旋哈氏豆属酸1-Naphthalenecarboxylic acid, 5-(2-(3-furanyl)ethyl)-3,4,4a,5,6,7,8,8a-octahydro-5,6,8a-trimethyl-, (4aR-(4aalpha,*lpha,6beta,8abeta))-对照药材 分 子 式: C20H28O3 分 子 量: 316.43452

SLC26A4  钠碘单独转运蛋白SLC26A4抗体丝石竹皂苷元3-O-B-D葡萄糖醛酸甲酯gypsogenin-3-O-glucuronide中药标准品  分 子 式: C36H54O10 分 子 量: 646.80796

Granzyme K  颗粒酶K抗体降二氢辣椒碱Octanamide,N-[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]-7-methyl-中药标准品  分 子 式: C17H27NO3 分 子 量: 293.40118

SRGN/Chondroitin sulfate proteoglycan core protein  硫酸软骨素多糖核心蛋白抗体原花青素C1[4,8':4',8''-Ter-2H-1-benzopyran]-3,3',3'',5,5',5'',7,7',7''-nonol,2,2',2''-tris(3,4-dihydroxyphenyl)-3,3',3'',4,4',4''-hexahydro-,(2R,2'R,2''R,3R,3'R,3''R,4R,4'S)-化学标准品 分 子 式: C45H38O18 分 子 量: 866.772420000001