PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

矢野氏鞘氨单胞菌IL-6R (Interleukin 6 Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Sphingomonas yanoikuyae

云芝栓孔菌 (变色栓菌)MIP-3β/ELC/CCL19 (Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit 拉丁属名: Trametes versicolor

阴沟肠杆菌ACE (Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit拉丁属名: Enterobacter cloacae

盘长孢状刺盘孢HLA-A (Leukocyte Antigen A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌CYTH1 (Cytohesin 1) ELISA Kit 拉丁属名: coli

被孢霉属INSR (Insulin Receptor) ELISA Kit用途: 松茸附生菌

食物中壳成分速测卡GP39 (Glycoprotein 39, Cartilage) ELISA Kit规格: 8次测定用量

空肠弯曲杆菌OSMR (Oncostatin M Receptor) ELISA Kit拉丁属名: jejuni

橘青霉RND1 (Rho Family GTPase 1) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium citrinum Thom

毛柄金钱菌(金针菇)SSRP1 (Structure Specific Recognition Protein 1) ELISA Kit用途: 食药用

大肠埃希氏菌PAR3 (Protease Activated Receptor 3) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

干酪乳杆菌Bax (Bcl-2 Associated X Protein) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus casei

杂色曲霉NUP155 (Nucleoporin 155kDa) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus versicolor

铅色青霉TLA (Thymus Leukemia Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium  lividum

大丽轮枝孢MCP-4/CCL13 (Monocyte Chemotactic Protein 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
絮状表皮癣菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格PEF1  调亡诱导因子家族蛋白PEF1抗体伽升沃 D9H-Xanthen-9-one,1,3,6-trihydroxy-8-(3-hydroxy-3-methylbutyl)-7-methoxy-2-(3-methyl-2-buten-1-yl)-中药标准品  分 子 式: C24H28O7 分 子 量: 428.47492

PHAPI2/APRIL  酸性核磷蛋白32家族B抗体酪醇2-(4-Hydroxyphenyl)ethanol中药标准品  分 子 式: C8H10O2 分 子 量: 138.1638

DRAK1/STK17A  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶17A抗体（DAP凋亡诱导蛋白激酶1）当药醇苷9H-Xanthen-9-one, 8-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,5-dihydroxy-3-methoxy-中药标准品  分 子 式: C20H20O11 分 子 量:

ERN2  内质网核信号转导蛋白2抗体Alpha-软脂酸香树精酯alpha-Amyrin palmitate中药标准品  分 子 式: C46H80O2 分 子 量: 665.1262

A1BG  α1B糖蛋白抗体醋酸独活属醇7H-Furo[3,2-g][1]benzopyran-7-one,9-[[(4R)-2,2,5,5-tetramethyl-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]-对照药材 分 子 式: C19H20O6 分 子 量: 344.3585

A1CF/Apo B RNA editing protein  载脂蛋白B-mRNA编码蛋白抗体ent-16α17-二羟基贝壳杉烷-18-羧酸16,17-dihydroxy-ent-kauran-19-oic acid化学标准品 分 子 式: C20H32O4 分 子 量: 336.466

FASTKD1  Fas活化激酶结构域蛋白1抗体Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH9.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: