PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

类干酪乳杆菌N-MID-OT (N-MID Osteocalcin) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  paracasei

长双歧杆菌GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 拉丁属名: Bifidobacterium  longum

普通层褶菌SGK2 (Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

香菇CA19-9 (Carbohydrate antigen19-9) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

橄榄色毛壳F-Box Protein 2(FBXO2) ELISA Kit 拉丁属名: Chaetomium olivaceum

抗性微杆菌TIEG1 (TGF Beta Inducible Early Response Gene 1) ELISA Kit拉丁属名: Microbacterium resistens

粉褶环柄菇DBP (Vitamin D Binding Protein) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌FDP (Fibrinogen Degradation Product) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

巨兽芽孢杆菌TAF2 (TATA Box Binding Protein Associated Factor 2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus megaterium

假单胞菌属HO2 (Heme Oxygenase 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌GDF11 (Growth Differentiation Factor 11) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

NocardiaCaN (Calcineurin) ELISA Kit拉丁属名: Nocardia sp.

枯草芽孢杆菌TMSβ10 (Thymosin Beta 10) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

多粘类芽孢杆菌BMP-2 (Bone Morphogenetic Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus polymyxa

胶孢LAT (Linker For Activation of T-cell) ELISA Kit用途: 植物病原物，用于种群的遗传学研究和炭疽病害的诊断和防治
犬附红细胞体探针法荧光定量PCR试剂盒规格TMEM49  跨膜蛋白49抗体槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷3-O-beta-D-glucopyranosyl-7-O-alpha-L-rhamnopyranoside 3',4',3,5,7-pentahydroxyflavone化学标准品 分 子 式: C27H30O16 分 子 量: 610.518

TMS1/ASC  凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体野黄芩素Scutellarein中药标准品  分 子 式: C15H10O6 分 子 量: 286.24

TPD52/Prostate and colon associated protein  和相关蛋白贝母素甲Peimine中药标准品  分 子 式: C27H45NO3 分 子 量: 431.6511

TPD54/TPD52L2  蛋白D54蛋白抗体异牡荆黄素4H-1-Benzopyran-4-one,6-尾-D-glucopyranosyl-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-化学标准品 分 子 式: C21H20O10 分 子 量: 432.3775

TRIM47  星形细胞瘤高表达蛋白抗体（环指蛋白100）雷公藤春碱3-Furancarboxylic acid,(8R,9R,10R,11S,12R,13R,14R,15S,21S,22S,23R)-10,13,22,23-tetrakis(acetyloxy)-12-[(acetyloxy)methyl]-7,8,9,10,12,13,14,15,17,18,19,20-dodecahydro-18,21-dihydroxy-8,18,21-trimethyl-5,17-dioxo-8,11-epoxy-9,12-ethano-11,15-methano-5H,11H-[1,9]dioxacyclooctadecino[4,3-b]pyridin-14-ylester中药标准品  分 子 式: C41H47NO20 分 子 量: 873.806580000001

TSP50  /睾丸抗原20抗体Kodak D-19显影液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TULP2/CT65/Cancer testis antigen 65  /睾丸抗原65强Tris盐缓冲液(pH7.5)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: