PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

胶孢CASP14 (Caspase 14) ELISA Kit用途: 植物病原物，用于种群的遗传学研究和炭疽病害的诊断和防治

米氏假单胞菌RXFP1 (Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas  migulae

假单胞菌GPIIb/IIIa (Platelet Membrane Glycoprotein IIb/IIIa) ELISA Kit用途: 在无机盐培养基中添加100mg/L的倍硫磷，降解率达30%左右

纤细白僵菌PIGR/SC (Polymeric Immunoglobulin Receptor/Membrane Secretory Component) ELISA Kit用途: 生防

艾比湖嗜盐碱红菌CTNNα1 (Catenin, Alpha 1) ELISA Kit 拉丁属名: Natronorubrum aibiense

苏云金芽孢杆菌ECFR (Eosinophil Chemotactic Factor Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  thuringiensis

PseudomonasMEC/CCL28 (Mucosae Associated Epithelia Chemokine) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  kunshanensis sp/ Nov/

庆丰链霉菌LIFR (Leukemia Inhibitory Factor Receptor) ELISA Kit 用途: 对水稻稻瘟病有防治效果

Rummeliibacillus stabekisiiCLC (Charcot Leyden Crystal Protein) ELISA Kit拉丁属名: Rummeliibacillus stabekisii

黑木耳MAG (Myelin Associated Glycoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌11-DH-TXB2 (11-Dehydro-thromboxane B2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

华根霉AFA (Anti-Filaggrin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus chinensis

金黄色葡萄球菌*Flt3 (FMS Like Tyrosine Kinase 3) ELISA Kit拉丁属名: Staphylococcus aureus Rosenbach

杏鲍菇PCP (Procollagen C Peptidase) ELISA Kit用途: 试验栽培

铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas aeruginosa(Schroeter) Migula
山羊附红细胞体探针法荧光定量PCR试剂盒供应商PNPLA6/NTE  含patatin样磷脂酶6抗体氧化白藜芦醇Oxyresveratrol中药标准品  分 子 式: C14H12O4 分 子 量: 244.24

OTC  鸟氨酸氨基甲酰转移酶抗体辽东楤木皂苷XAraloside X中药标准品  分 子 式: C60H98O28 分 子 量: 1266

Desmoglein 1/DSG1  桥粒芯糖蛋白1氯化铵溶液(5mol/L)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CAMKIV/CAMK4  钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4抗体植酸钙myo-Inositol,1,2,3,4,5,6-hexakis(dihydrogen phosphate), calcium salt (1:6)中药标准品  分 子 式: C6H6O24P6-12.6[Ca+2] 分 子 量: 888.408240000001

phospho-CAMK4(Thr196 + Thr200)  磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4抗体9,10-二甲氧基铁屎米酮9,10-Dimethoxycanthin-6-one化学标准品 分 子 式: C16H12N2O3 分 子 量: 280.278

LBP1/Upstream Binding Protein 1  上游结合蛋白1抗体胡椒碱Piperine中药标准品  分 子 式: C17H19NO3 分 子 量: 285.34

SDF4  基质细胞衍生因子4抗体（钙结合蛋白）四氢黄连碱Tetrahydrocoptisine中药标准品  分 子 式: C19H17NO4 分 子 量: 323.34258