PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

微白伦茨氏菌Try2 (Trypsinogen II) ELISA Kit拉丁属名: Lentzea albida

溶淀粉类芽孢杆菌C5c (Complement C5 Convertase) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus amylolyticus

沉积物盐坑微菌SNRPD1 (Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide D1) ELISA Kit 拉丁属名: Salinimicrobium sediminis

Brenneria salicis OSF (Osteoclast Stimulating Factor 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

生活饮用水  总硬度、氯化物 GZMK (Granzyme K) ELISA Kit拉丁属名: 生活饮用水  总硬度、氯化物

冻胶假丝酵母MPIF2 (Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 2) ELISA Kit拉丁属名: Candida  gelida

产朊假丝酵母CRN (Corin) ELISA Kit拉丁属名: Candida  utilis

尖镰孢 葫芦专化型D5R/DRD5 (Dopamine Receptor D5) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

南方盐单胞菌PI3K (Phosphoinositide-3-Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Halomonas meridiana

灰树花-1C4b (Complement Component 4b) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胶孢TF (Transfer Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球孢白僵菌SCF (Stem Cell Factor) ELISA Kit 用途: 蛾类防治

解淀粉芽胞杆菌植物亚种GLUT3 (Glucose Transporter 3) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum

浅囊状栓菌ANGPT4 (Angiopoietin 4) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

平菇EXT1 (Exostoses 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
猫附红细胞体探针法荧光定量PCR试剂盒供应商DICER1/Dicer  核糖核酸酶Dicer抗体苦瓜皂苷 L(3beta,7beta,9beta,10alpha,17beta)-7-(beta-D-glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-17-[(3E)-5-hydroxy-1,5-dimethylhex-3-en-1-yl]-4,4,14-trimethylestr-5-ene-9-carboxaldehyde化学标准品 分 子 式: C36H58O9 分 子 量: 634.84032

Cullin 4B  CUL4B蛋白抗体3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-醇3β-acetoxy-eupha- 7,25-dien-24(R)-ol中药标准品  分 子 式: C32H52O3 分 子 量: 484

TIAM1  T侵袭转移诱导蛋白1抗体PBST(1 pH7.5)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SRD5A2  类固醇5α还原酶2抗体胆维他Anethole Trithione中药标准品  分 子 式: C10H8Os3 分 子 量: 240.35

ANAPC1  细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体HEPES溶液(1mol/L,pH6.8-8.0,非无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

AGEs  晚期糖基化终末产物抗体甲基原纤细薯蓣皂苷b-D-Glucopyranoside, (3b,22a,25R)-26-(b-D-glucopyranosyloxy)-22-methoxyfurost-5-en-3-yl O-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl-(1®2)-O-[b-D-glucopyranosyl-(1®3)]-化学标准品 分 子 式: C52H86O23 分 子 量: 1079.22544

Calpastatin  钙蛋白酶抑制蛋白抗体氯化天竺葵素-3-O-芸香糖苷Pelargonidin-3-O-rutinoside chloride化学标准品 分 子 式: C27O14+.Cl- 分 子 量: 583.7335