PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

金黄壳囊孢PLCβ1/PI-PLC (Phospholipase C Beta 1, Phosphoinositide Specific) ELISA Kit拉丁属名: Cytospora chrysosperma

暗孢毛壳TERT (Telomerase Reverse Transcriptase) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium atrosporum

白黑链霉菌PDI (Protein Disulfide Isomerase) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces alboniger

灰树花MGST1 (Microsomal Glutathione S Transferase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Grifola  frondosa

植物乳杆菌CALD (Caldesmon) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

沼泽红假单胞菌NRG-1 (Neuregulin 1) ELISA Kit用途: 用于微生物肥料，水产养殖，污水处理

枯草芽孢杆菌GDF5 (Growth Differentiation Factor 5) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

不动杆菌NOX1 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Acinetobacter sp.

ArthrobacterNPYR5 (Neuropeptide Y Receptor Y5) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter phenanthrenivorans

德氏乳杆菌保加利亚亚种LOXL4 (Lysyl Oxidase Like Protein 4 ) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  delbrueckii subsp. bulgaricus

黄杆菌SDF-4 (Stromal Cell Derived Factor 4) ELISA Kit 拉丁属名: Flavobacterium beibuense

新城疫病毒CCL1 (Chemokine C-C-Motif Ligand 1) ELISA Kit拉丁属名: Newcastle       disease virus

枯草芽孢杆菌TTN (Titin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

沙阿霉素链霉菌ADMA (Asymmetrical Dimethylarginine) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces zaomyceticus

栖沙盐水孢菌GATA4 (GATA Binding Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Salinispora arenicola
性大肠杆菌O157血清型探针法荧光定量PCR试剂盒规格ADA/Adenosine deaminase  腺苷脱氨酶抗体PBS-BSA溶液(含钙镁,1%BSA)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Cryopyrin/CIAS1/NALP3  细胞凋亡诱导蛋白NALP3抗体紫杉醇CTAXOL C(P) 中药标准品  分 子 式: C46H57NO14 分 子 量: 847.943080000001

Cyclin B2  周期素B2抗体2,4,6,6-四甲基-3(6H)-吡啶酮2,4,6,6-Tetramethylpyridin-3(6H)-one对照药材 分 子 式: C9H13NO 分 子 量: 151.20562

PRX/periaxin  轴周蛋白PRX抗体福尔马林-硫酸锌固定液(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Calumenin/CALU  钙腔蛋白三乙酸柚皮素酯2-(4-Acetoxyphenyl)-4-oxochroman-5,7-diyl diacetate对照药材 分 子 式: C21H18O8 分 子 量: 398.36282

CD98  CD98重链抗原抗体DNA保存液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Emerin  Emerin蛋白抗体4',6-二甲基-2-羟基苯乙酮1-(2-Hydroxy-4,6-dimethoxyphenyl)ethanone对照药材 分 子 式: C10H12O4 分 子 量: 196.19988