PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

蜡状芽孢杆菌CKLFSF7 (Chemokine Like Factor Superfamily 7) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

谷氨酸棒杆菌PDGFRβ (Platelet Derived Growth Factor Receptor Beta) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

台湾根霉GCK (Glucokinase) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus  formosensis

钟器腐霉IGFBP-3 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酸热脂环酸芽胞杆菌PKIγ (Protein Kinase Inhibitor Gamma) ELISA Kit 拉丁属名: Alicyclobacillus  acidocaldarius

枯草芽孢杆菌STAT1 (Signal Transducer and Activator of Transcription 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜麦芽寡养单胞菌REG3α (Regenerating Islet Derived Protein 3 Alpha) ELISA Kit 用途: 微生物肥料

红菇属GHRH (Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

亮叶耳环根瘤菌AChE (Acetylcholinesterase) ELISA Kit用途: 固氮

球孢白僵菌SMAF (Specific Macrophage Arming Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

长枝木霉Fcγ (Fc Fragment of IgG) ELISA Kit 拉丁属名: Trichoderma longibrachiatum

豌豆根瘤菌NCAM/CD56 (Neural Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 用途: 与豌豆共生固氮

毛栓孔菌MCSP (Melanoma Associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit拉丁属名: Trametes hirsuta

根霉属的菌DLK-1 (Delta Like 1 Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus sp.

地衣芽胞杆菌PLGA (Plasminogen Activator) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus licheniformis
粪肠球菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书HSD17B1/HSD17  羟类固醇脱氢酶17β抗体羟基吴茱萸碱Hydroxyevodiamine中药标准品  分 子 式: C19H17N3O2 分 子 量: 319.362

BCNG1/HCN1  脑环核苷酸门控通道蛋白1抗体Alfa-葡萄素alpha-Viniferin中药标准品  分 子 式: C42H30O9 分 子 量: 678.6822

BCAS3  相关蛋白3抗体桑黄酮G；桑根酮Ckuwanon G化学标准品 分 子 式: C40H36O11 分 子 量: 692.70724

MRGX1/MRGPRC/SNSR  G蛋白偶联受体MRGX1抗体山椒子烯醇((1R,2S,5R,6S)-5-(Benzoyloxy)-1,2,6-trihydroxycyclohex-3-en-1-yl)methyl benzoate中药标准品  分 子 式: C21H20O7 分 子 量: 384.3793

TSPY1  睾丸特异定蛋白质编码Y1抗体Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.0,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

DDCT/DDT  D型多巴色素脱羧酶Western转移缓冲液(5×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Cyclophilin B  亲环蛋白PPIB抗体LevatinSpiro[furan-3(2H),6'(7'H)-[1H-3,9a]methano[2]benzoxepin]-1',2-dione,5-(3-furanyl)octahydro-7'-methylene-, (3S,3'R,5S,5'aS,9'aR)-化学标准品 分 子 式: C19H20O5 分 子 量: 328.3591