PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

毕赤酵母CSF2Rα (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Alpha) ELISA Kit 用途: 高效发酵 植酸酶

枯草芽孢杆菌NOX5 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 5) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型AGA (Anti-Gliadin Antibody) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Rhizobium nepotumCABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

冷生明串珠菌WARS (Tryptophanyl tRNA Synthetase) ELISA Kit拉丁属名: Leuconostoc gelidum

少根根霉MCAM  (Melanoma Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 拉丁属名: Rhizopus  arrhizus

北方蜜环菌SPTβN4 (Spectrin Beta, Non Erythrocytic 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

海洋杆菌GAP (GTPase Activating Protein) ELISA Kit拉丁属名: Pontibacter sp.

副猪嗜血杆菌ELN (Elastin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

Bacillus subtilis subsp. inaquosorumFOXO1 (Forkhead Box Protein O1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

柱枝双孢霉DPYD (Dihydropyrimidine Dehydrogenase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细极链格孢ANG (Angiogenin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

肉桂链霉菌ATM (Ataxia Telangiectasia Mutated) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces cinnamoneus

总状毛霉HSPG (Heparan Sulfate Proteoglycan) ELISA Kit 拉丁属名: Mucor racemosus

福山假丝酵母GKN2 (Gastrokine 2) ELISA Kit 拉丁属名: Candida fukuyamaensis
肠侵袭性大肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书LRRN5  富含亮氨酸重复神经元5抗体氨苄青霉素溶液(Ampicillin,50mg/ml)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Lipophilin B  亲脂性蛋白B抗体格列齐特Gliclazide中药标准品  分 子 式: C15H21N3O3S 分 子 量: 323.41

MAG1  转移相关蛋白抗体BLOTTO溶液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MARVELD1  候选抑制基因MARVELD1抗体瓦托品Butanoicacid, 2-methyl-, (3-endo)-8-methyl-8-azabicyclo[3.2.1]oct-3-yl ester, (2S)-化学标准品 分 子 式: C13H23NO2 分 子 量:

MOBK1B/C2orf6  2号染色体开放阅读框6抗体亚硫酸氢钠溶液(5%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

MTCP1  成熟T淋巴细胞增殖蛋白1抗体ELISA包被缓冲液(1×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Mimitin  MYC诱导线粒体蛋白抗体福尔马林固定液(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: