PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

多主棒孢菌sgp130 (soluble Glucoprotein 130) ELISA Kit拉丁属名: Corynespora cassiicola

毛霉属OSM (Oncostatin M) ELISA Kit 拉丁属名: Mucor  sp.

乙酸钙不动杆菌LUM (Lumican) ELISA Kit拉丁属名: Acinetobacter calcoaceticus

点柄粘盖牛肝MCRS1 (Microspherule Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Suillus granulatus

弗雷德里克斯堡假单胞菌UPP2 (Uridine Phosphorylase 2) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas frederiksbergensis

酿酒酵母SEMA3B (Semaphorin 3B) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

Paraburkholderia sp.FE (Ferritin) ELISA Kit拉丁属名: Paraburkholderia sp.

短小芽孢杆菌snRNP/Sm (Small Nuclear Ribonucleoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus pumilus

紫麦角菌CNX (Calnexin) ELISA Kit拉丁属名: Claviceps purpurea

艾登短芽孢杆菌ARRβ1 (Arrestin Beta 1) ELISA Kit 拉丁属名: Brevibacillus aydinogluensis

节杆菌GAL4 (Galectin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Arthrobacter  alpinus

雷州湾芽孢杆菌AVPR1A (Arginine Vasopressin Receptor 1A) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  neizhouensis

亮白曲霉Bid (BH3 Interacting Domain Death Agonist) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  candidus

鞘氨单胞菌属C3c (Complement Fragment 3c) ELISA Kit拉丁属名: Sphingomonas hylomecon sp. Nov

变异居白蚁菌TI-Ag (Thymus Independent Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Isoptericola variabilis
脑胞内原虫属通用·探针法荧光定量PCR试剂盒说明书CA8  碳酸酐酶相关蛋白8抗体FAB固定液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CACNB1  钙通道电压依赖性β1蛋白抗体1,4,5,6-四羟基-7-苯基氧蒽酮1,4,5,6-Tetrahydroxy-7-(3-methylbut-2-en-1-yl)-9H-xanthen-9-one对照药材 分 子 式: C18H16O6 分 子 量: 328.31604

CDK5RAP3  周期素依赖性激酶5激活结合蛋白C53抗体草酸Oxalic acid中药标准品  分 子 式: C2H2O4 分 子 量: 90.03

CENPH  着丝粒蛋白H抗体12-乙酰氧基松香酸12-Acetoxyabietic acid对照药材 分 子 式:  分 子 量:

CKAP4  细胞骨架相关蛋白4抗体4-表可木酸1-Naphthalenecarboxylic acid,

decahydro-1,4a-dimethyl-6-methylene-5-[(2E)-3-methyl-2,4-pentadienyl

]-, (1R,4aR,5S,8aR)-对照药材 分 子 式: C20H30O2 分 子 量:

CRISP3  富含半胱氨酸分泌蛋白3抗体等效-16beta,17-二羟基-19-异贝壳杉烷酸Kauran-18-oic acid,16,17-dihydroxy-, (4a)-对照药材 分 子 式: C20H32O4 分 子 量: 336.46568

CKMT/Creatine kinase MT  酸性型线粒体肌酸激酶抗体油酸甲酯Methyl oleate中药标准品  分 子 式: C19H36O2 分 子 量: 296.49