PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

德尔布有孢酵母cADPRH/CD38 (Cyclic ADP Hydrolase) ELISA Kit拉丁属名: Torulaspora delbrueckii

酿酒酵母ATF-1 (Activating Transcription Factor 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

腐殖质链霉菌TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit拉丁属名: Xanthomonas arboricola

丝衣霉菌CR2/CD21 (Complement Receptor 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

美澳型核果褐腐病菌sCKR (Soluble Cytokine Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

阿克苏海洋杆菌GPR37 (G Protein Coupled Receptor 37) ELISA Kit拉丁属名: Pontibacter akesuensis

绿色木霉FGF19 (Fibroblast Growth Factor 19) ELISA Kit拉丁属名: Trichoderma viride

阮氏菌MCP-2/CCL8 (Monocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Ruania   sp.

枯草芽孢杆菌PAP (Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

构巢曲霉PLA2G4D (Phospholipase A2, Group IV D) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus nidulans

壳菌ACHAP (Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit用途: 用于该菌种群遗传学研究及与苹果轮纹、干腐、杨梅和石榴流胶、猕猴桃腐烂等病菌系统学研究

巴斯德酵母MBLR (Mannose Binding Lectin Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces pastorianus

博伊丁假丝酵母MAT (Matrilysin) ELISA Kit拉丁属名: Candida boidinii

史氏芽孢杆菌MYH1 (Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  smithii

长枝木霉KNG1 (Kininogen 1) ELISA Kit拉丁属名: Trichoderma  longibrachiatum
艾美耳球虫属通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商BAZ/ACF1  溴区结构域相邻锌指蛋白1A抗体3-(4-羟基苯基)-1-丙醇3-(4-Hydroxyphenyl)-1-propanol对照药材 分 子 式: C9H12O2 分 子 量: 152.19038

FAS/Apo-1/CD95  载脂蛋白1抗体荷花山桂花糖 AArillatose-B对照药材 分 子 式: C22H30O14 分 子 量: 518.4652

CPE  胰羧肽酶E抗体麦冬甲基黄烷酮AMethylophiopogonanone A中药标准品  分 子 式: C19H18O6 分 子 量: 342.34262

Myotilin  肌收缩蛋白MYOT抗体啤酒甾醇Ergosta-7,22-diene-3,5,6-triol,(3b,*,6b,22E)-对照药材 分 子 式: C28H46O3 分 子 量: 430.66304

PMCA  细胞膜钙转运ATP酶抗体根皮素Phloretin中药标准品  分 子 式: C15H14O5 分 子 量: 274.27

GABRA3/GABA A Receptor alpha 3  G氨基丁酸受体α3抗体RNA保存液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NCEH/AADACL1  中性胆固醇酯水解酶1抗体柴胡皂苷CSaikosaponin C中药标准品  分 子 式: C48H78O17 分 子 量: 927.12