PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

粗皮马勃SERT (Serotonin Transporter ) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母GLUT2 (Glucose Transporter 2) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

紫红曲霉RAPGEF1 (Rap Guanine Nucleotide Exchange Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Monascus purpureus

苏云金芽胞杆菌IκBβ (Inhibitory Subunit of NF Kappa B Beta) ELISA Kit 用途: 用于抗虫基因的分离和抗虫相关基础研究。

金龟子假丝酵母MAP-2 (Microtubule Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Candida oxycetoniae

水冷源橙色单胞菌6-K-PG (6-Keto-prostaglandin) ELISA Kit拉丁属名: Aurantimonas  frigidaquae

阿木氏链霉菌EPP (Erythrocyte Protoporphyrin) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces almquistii

香菇NT-4 (Neurotrophin 4) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母NUP205 (Nucleoporin 205kDa) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

全食副球菌TNFRSF1A (Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

类产碱假单胞菌CNTN2 (Contactin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas pseudoalcaligenes

啤酒酵母ALD (Aldolase) ELISA Kit用途: 实验研究

蕈青霉IGF1R (Insulin Like Growth Factor 1 Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium paxilli

草菇AQP-2 (Aquaporin 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

PelagibacteriumACP1 (Acid Phosphatase 1) ELISA Kit拉丁属名: Pelagibacterium  halotolerans
艾利希体属通用探针法荧光定量PCR试剂盒规格NF-ATc4  T细胞激活核转录因子4抗体洋川芎内酯HSenkyunolide H中药标准品  分 子 式: C12H16O4 分 子 量: 224.25304

Unc18-3  突触囊泡融合蛋白Unc18-3抗体蝙蝠葛氰苷(2Z)-2-[(4S,6R)-4-hydroxy-6-[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-1-cyclohex-2-enylidene]acetonitrile中药标准品  分 子 式: C14H19NO7 分 子 量: 313.30316

caspase-8 subunit p18  半胱氨酸蛋白酶8抗体胰蛋白酶溶液(1%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

IRAK1  白介素-1受体相关激酶1抗体羽扇豆鹼7,14-Methano-2H,11H-dipyrido[1,2-a:1',2'-e][1,5]diazocin-11-one,dodecahydro-, (7S,7aR,14S,14aS)-对照药材 分 子 式: C15H24N2O 分 子 量: 248.36386

phospho-APE(Ser1417)  磷酸化肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体茜素-1-甲醚9,10-Anthracenedione,2-hydroxy-1-methoxy-化学标准品 分 子 式: C15H10O4 分 子 量: 254.2375

PRDM1/Blimp1  B淋巴细胞诱导成熟蛋白1抗体6-羟基山奈酚 3-芸香糖-6-葡萄糖苷6-Hydroxykaempferol 3-Rutinoside -6-glucoside化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

Dlx1  同源转录因子DLX1抗体Spinner盐粉剂(1×,无酚红)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: