PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

苹果链格孢GSTμ2/GSTm2 (Glutathione S Transferase Mu 2, Muscle) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

红细菌属GTC (General Transcription Complex) ELISA Kit拉丁属名: Rhodobacter sp.

赖氨酸芽胞杆菌属OPGL (Osteoprotegerin Ligand) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus sp.

Bacillus GPRC5A (G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus

假单胞菌属iPLA2 (Phospholipidase A2, Calcium Independent) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas sp.

酿酒酵母GJβ1 (Gap Junction Protein Beta 1) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

球孢白僵菌AR (Amphiregulin) ELISA Kit拉丁属名: Beauveria bassiana

盘多毛孢CgB (Chromogranin B) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

松口蘑Gp49a (Glycoprotein 49A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

干环褶孔菌ACTα1 (Actin Alpha 1, Skeletal Muscle) ELISA Kit 拉丁属名: Phellinus xeranticus

稻离蠕孢GPLD1 (Glycosylphosphatidylinositol Specific Phospholipase D1) ELISA Kit用途: 教学科研，分类

酿酒酵母PMN Elastase (Polymorphonuclear Elastase) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

昆明链霉菌PPAR-δ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Delta) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces kunmingensis

香菇(林研1号)ADAM9 (A Disintegrin And Metalloprotease 9) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

中间普氏菌OVA sIgG (Ovalbumin Specific IgG) ELISA Kit 拉丁属名: Prevola intermedia
犬艾利希体探针法荧光定量PCR试剂盒 phospho-eIF4EBP1/2/3(Thr36)  磷酸化4E结合蛋白1,2,3抗体30-羟基藤黄酸30-Hydroxygambogic acid化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

PI3 Kinase p110 beta  磷脂酰肌醇激酶（PI3Kβ）抗体3'-甲氧基-5'-羟基异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

SNX27  SNX27蛋白抗体山竹子素garcinol中药标准品  分 子 式: C38H50O6 分 子 量: 602.8

TRPV4/TRP12  瞬时受体电位蛋白12抗体灰叶草素, 羟基鱼藤素3H-Bis[1]benzopyrano[3,4-b:6',5'-e]pyran-7- (7aH)-one,13,13a-dihydro-7a-hydroxy-9,10- dimethoxy-3,3-dimethyl-,(7aR,13aR)- 对照药材 分 子 式: C23H22O7 分 子 量: 410.41658

TH/T-H glycoprotein  TH糖蛋白抗体野马追内酯K(1E,3beta,4E,6alpha,7beta,8beta)-3-hydroxy-8-[(4-hydroxytigloyl)oxy]germacra-1(10),4,11(13)-trieno-12,6-lactone化学标准品 分 子 式: C20H26O6 分 子 量: 362.417

UHRF1  核蛋白95抗体Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH9.0,RNase free)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PPP4C  丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶4C抗体白桦脂酸betulinic acid中药标准品  分 子 式: C30H48O3 分 子 量: 456.71