PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

慢生根瘤菌GRIA1(Glutamate receptor 1) ELISA Kit用途: 与胡枝子共生固氮

食酸戴尔福特菌*拉丁属名: Delftia  acidovorans

多杀性巴氏杆菌IL-8 (Interleukin 8) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

褐球固氮菌IL-1β (Interleukin 1 Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Azotobacter chroococcum

节杆菌属IFN-γ (Interferon Gamma) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter  sp.

滕仓赤霉IgG (Immunoglobulin G) ELISA Kit拉丁属名: Gibberella  fujikuroi

大肠埃希菌IL-10 (Interleukin-10) ELISA Kit拉丁属名: coli

山绿豆根瘤菌IL-12 p40 (Interleukin 12 p40) ELISA Kit用途: 固氮。

*正红菇IL-18 (Interleukin 18) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

拜耳接合酵母IL-23 p40 (Interleukin 23 p40) ELISA Kit拉丁属名: Zygosaccharomyces  bailii

酿酒酵母TGF-β1 (Transforming Growth Factor β1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

伞枝犁头霉TNF-α (Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Absidia corymbifera

枯草芽孢杆菌*INS (Insulin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

长柄链格孢ALB (Albumin) ELISA Kit用途: 植物病原物，用于该菌种群遗传学研究

鲜绿青霉HP (Haptoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium viridicatum
牛肺线虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格HLC3/Kanadaptin  癌基因蛋白3抗体枸橼酸钠抗凝剂(4%,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

OVCA2  相关基因2蛋白抗体脱水长春碱3',4'-Anhydrovinblastine中药标准品  分 子 式: C46H56N4O8 分 子 量: 792.95884

PRUNE/DRES17  相关蛋白DRES17抗体白头翁皂苷BPulchinenoside B中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

TEM7R/Plxdc2  内皮标记相关蛋白质7抗体柳杉二醇Cryptomeridiol对照药材 分 子 式: C15H28O2 分 子 量: 240.38162

phospho-LSP1 (Ser252)  磷酸化白细胞F肌动蛋白结合蛋白抗体β-莎草醇β-Rotunol对照药材 分 子 式: C15H22O2 分 子 量: 234.34139

MAP3K2/MEKK2  丝裂原活化蛋白激酶激酶2抗体梓醇6-咖啡酸酯Verminoside化学标准品 分 子 式: C23H28O12 分 子 量: 496.46122

IFNA4/IFNA76/IFNA M1  干扰素α4抗体大蒜素Allicin化学标准品 分 子 式: C6H10Os2 分 子 量: 162.26