PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

类干酪乳杆菌PAP (Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  paracasei

灰黄青霉PAI-1 (Plasminogen Activator Inhibitor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium griseofulvum

谷氨酸棒杆菌PAI-2 (Plasminogen Activator Inhibitor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

酿酒酵母tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

香菇属Plg (Plasminogen) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

少孢酵母PAF (Platelet Activating Factor) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces exiguus

*鸡油菌都不能订购PDGF (platelet-derived growth factor) ELISA Kit 拉丁属名: Cantharellus cibarius Fr.

突脐蠕孢菌PDGFA (Platelet Derived Growth Factor Subunit A) ELISA Kit用途: 研究

雀黄链霉菌PDGFB (Platelet Derived Growth Factor Subunit B) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces canarius

链格孢PDGF-C (Platelet Derived Growth Factor C) ELISA Kit 拉丁属名: Alternaria sp.

克鲁斯假丝酵母PDGF-D (Platelet Derived Growth Factor D) ELISA Kit 拉丁属名: Candida krusei

杨齿白木层孔菌PDGFRL (Platelet Derived Growth Factor Receptor Like Protein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠杆菌PDGFsR-α (Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α) ELISA Kit用途: 教学科研，构建大肠杆菌野生型的突变株。

淡紫拟青霉PF3 (Platelet Factor 3)  ELISA Kit用途: 用作生物防治研究

菜豆间座壳PF-4 (Platelet Factor-4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
克罗诺杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒说明书PCSK9/NARC1  神经细胞凋亡调节转化蛋白1抗体（前蛋白转化酶枯草溶菌素9）维采宁-14',5,7-Trihydroxy-6-xylosyl-8-glucosylflavone化学标准品 分 子 式: C26H28O14 分 子 量: 564.49212

PIGR  多聚免疫球蛋白受体抗体异樱花亭ISOSAKURANETIN中药标准品  分 子 式: C16H14O5 分 子 量: 286.27936

PRDM2/RIZ1  锌指蛋白RIZ1抗体N-反-肉桂基-N-甲基-(1-萘甲基)胺盐酸盐Naftifine hydrochloride化学标准品 分 子 式: C21H21N.HCl 分 子 量: 323.86

PRMT6  组蛋白精氨酸甲基转移酶6抗体川麦冬甘A中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

PRSS8  丝氨酸蛋白酶8抗体环桉烯醇9,19-Cycloergost-24(28)-en-3-ol,4,14-dimethyl-, (3b,4a,*)-对照药材 分 子 式: C30H50O 分 子 量: 426.7174

TCF3/E2A/E47  转录因子3抗体（螺旋环螺旋蛋白HE47）锦葵色素1-Benzopyrylium,3,5,7-trihydroxy-2-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-, chloride (1:1)化学标准品 分 子 式: C17H15O7+.Cl- 分 子 量: 366.7498

phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355)  磷酸化转录因子3抗体PBS-BSA溶液(1%BSA)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: