PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

泡盛曲霉NGAL (Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  awamori

恶臭假单胞菌NOX1 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas putida

条纹白蚁伞NOX4 (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate Oxidase 4) ELISA Kit用途: 食用菌

伞枝犁头霉NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate) ELISA Kit拉丁属名: Absidia corymbifera

米曲霉N-ACHR (Nicotinic Acetylcholine Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  oryzae

炭黑曲霉NT-proBNP (N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus carbonarius

Actinomadura cellulosilyticaPIIINP (N-Terminal Procollagen III Propeptide) ELISA Kit拉丁属名: Actinomadura cellulosilytica  sp/ nov/

大肠埃希氏菌NFIL3 (Nuclear Factor, Interleukin 3 Regulated) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia  coli

河生肠杆菌NF-κB (Nuclear Factor Kappa B)ELISA Kit拉丁属名: Enterobacter amnigenus

网孢正青霉NF-κB p65(Nuclear Factor-κB P65) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium reticulisporum

白假丝酵母NRIP1 (Nuclear Receptor Interacting Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Candida  albicans

冷温木拉克酵母NXF1 (Nuclear RNA Export Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Mrakia frigida

卡莫纳枝芽孢杆菌NUP107 (Nucleoporin 107kDa) ELISA Kit 拉丁属名: Virgibacillus carmonensis

黑曲霉NUP153 (Nucleoporin 153kDa) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

地霉NUP155 (Nucleoporin 155kDa) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
棒杆菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒规格GAS8  生长停滞特异性蛋白8抗体DL-2-氨基丁酸DL-2-Aminobutyric acid化学标准品 分 子 式: C4H9NO2 分 子 量: 103.11976

GTPBP4/CRFG  GTP结合蛋白4抗体（慢性蛋白）老鹳草素Geraniin中药标准品  分 子 式: C41H28O27 分 子 量: 952.64482

HACE1  E3泛素蛋白连接酶HACE1抗体甲基麦冬高黄酮A4H-1-Benzopyran-4-one, 3-(1,3-benzodioxol-5-ylmethyl)-5,7-dihydroxy-6,8-dimethyl-中药标准品  分 子 式: C19H16O6 分 子 量: 340.32674

SMARCA6/HELLS  淋巴特异性解旋酶抗体白头翁皂苷DLup-20(29)-en-28-oic acid,

3-[(O-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl-(1?2)-O-[b-D-glucopyranosyl-(1?4

)]-a-L-arabinopyranosyl)oxy]-23-hydroxy-, (3b,4a)-中药标准品  分 子 式: C47H76O17 分 子 量: 913.09614

SMARCA1/SNF2L  解旋酶SNF2L抗体长春碱衍生物[8,15'-Biaspidospermidine]-3,3'-dicarboxylicacid,2,2',3,3'-tetradehydro-6',7':7,16'-diepoxy-6,15-dihydroxy-16,17-dimethoxy-,dimethyl ester, (*,6b,7a,8a,12R,19a)-(5'a,6'b,7'b,12'R,19'a)-对照药材 分 子 式: C44H50N4O10 分 子 量:

ACBD6  酰基辅酶A结合结构域蛋白6抗体CroverinCroverin化学标准品 分 子 式: C21H22O6 分 子 量: 370

ACVR1B/ALK4  激活素A受体1B抗体对叶百部碱三氟乙酸盐中药标准品  分 子 式:  分 子 量: