PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

产马乳酒乳杆菌高加索酸奶粒亚种LHRH (Luteinizing Hormone-Releasing Hormone) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus kefiranofaciens subsp. kefirgranum

白孢链霉菌逝霉素变种LFA-3 (Lymphocyte Function Associated Antigen 3) ELISA Kit 用途: 分类 研究

半裸镰孢菌Lptn/XCL1 (Lymphotactin) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium incarnatum

细黄链霉菌乳糖变种M-CSF (Macrophage Colony-Stimulating Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces microflavus var. lactosus

大肠埃希氏菌MIP-1α (Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

枯草芽孢杆菌枯草亚种MIP-1β (Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis subsp. subtilis

近平滑假丝酵母PYGL (Glycogen Phosphorylase, Liver) ELISA Kit 拉丁属名: Candida parapsilosis

粉红掷孢酵母MIP-3α (Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Sporobolomyces roseus

根瘤菌MIP-3β( Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

藤黄微球菌MIP-5 (Macrophage Inflammatory Protein 5) ELISA Kit拉丁属名: Micrococcus luteus

秦氏蜜环菌MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

*灰葡萄孢菌MDC/CCL22 (Macrophage-Derived Chemokine) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

杰氏假单胞菌MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ(Major  Histocompatibility ComplexⅠ) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  jessenii

霍乱弧菌MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ(Major  Histocompatibility ComplexⅡ) ELISA Kit 拉丁属名: Vibrio cholerae

须壳孢MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ(Major  Histocompatibility ComplexⅢ) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
白喉棒杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格CPI17 alpha  蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗体亚麻酸甲酯Methyl Linolenate化学标准品 分 子 式: C19H32O2 分 子 量: 292.48

phospho-CPI17 alpha (Thr38)   磷酸化蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗体Triton-SDS细胞裂解液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ADRA2  ADRA2肾上腺素能受体2抗体大黄酚-8-O-葡萄糖苷Chrysophanol 8-O-beta-D-glucoside中药标准品  分 子 式: C21H20O9 分 子 量: 416.3781

ADRB1  肾上腺素能受体β1抗体山栀苷甲酯Cyclopenta[c]pyran-4-carboxylicacid, 1-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,4a,5,6,7,7a-hexahydro-5,7-dihydroxy-7-methyl-,methyl ester, (1S,4aS,5R,7S,7aS)-中药标准品  分 子 式: C17H26O11 分 子 量:

APE/Girdin  肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体芥子醛配糖物2-Propenal, 3-[4-(b-D-glucopyranosyloxy)-3,5-dimethoxyphenyl]-,(2E)-对照药材 分 子 式: C17H22O9 分 子 量:

Drebrin  脑发育调节蛋白抗体愈创木酚2-Methoxyphenol中药标准品  分 子 式: C7H8O2 分 子 量: 124.13722

DAG1  肌萎缩相关蛋白DAG1抗体蛇莓甙A[1]Benzopyrano[5,4,3-cde][1]benzopyran-5,10-dione,2,8-dihydroxy-3-methoxy-7-(b-D-xylopyranosyloxy)-对照药材 分 子 式: C20H16O12 分 子 量: