PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

黄色短杆菌BK (Bradykinin) ELISA Kit拉丁属名: Brevibacterium  flavum

中慢生华癸根瘤菌ANG2 (Angiopoietin 2) ELISA Kit用途: 与紫云英共生结瘤固氮

孟氏假单胞菌BNP (Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas mandelii

大肠埃希菌BRAK (Breast And Kidney Expressed Chemokine) ELISA Kit 拉丁属名: coli

产气荚膜梭菌 毒素C型VE-Cadherin (Vascular Endothelial Cadherin) ELISA Kit拉丁属名: perfringens Type C

单形拟杆菌NCAD (Neural Cadherin) ELISA Kit拉丁属名: Bacteroides uniformis

长赤细菌CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Erythrobacter longus

灵芝(红芝, 赤芝)CAN (Calcineurin) ELISA Kit 拉丁属名: Ganoderma lucidum

轮枝孢CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜根寡养单胞菌β-Lg (Beta-Lactoglobulin) ELISA Kit拉丁属名: Stenotrophomonas rhizophila

多节孢属CASR (Calcium Sensing Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Nodulisporium  griseobrunneum

好食脉孢菌CAMK2 (Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase-Ⅱ) ELISA Kit拉丁属名: Neurospora sitophila

酿酒酵母Alkaline Phosphatase, Intestinal (ALPI) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

黄疣伦茨氏菌CAM (Calmodulin) ELISA Kit 拉丁属名: Lentzea flaviverrucosa

植物乳杆菌CNX (Calnexin) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum
气肿疽梭状芽孢杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 ADAMTS7  整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体3-吲哚乙酸Indole-3-acetic acid中药标准品  分 子 式: C10H9NO2 分 子 量: 175.18396

BRLF1  EBV立即早期基因BRLF1抗体纹香茶菜 B1,4-Phenanthrenedione,10-(acetyloxy)-2-[2-(acetyloxy)-1-methylethyl]-4b,5,6,7,8,8a,9,10-octahydro-3,9-dihydroxy-4b,8,8-trimethyl-(9CI)对照药材 分 子 式: C24H32O8 分 子 量:

Cancer/testis antigen 1B/1A  /睾丸抗原1B/1AD-果糖D-Fructose中药标准品  分 子 式: C6H12O6 分 子 量: 180.15588

ADAMTS7(NT)  整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗体 (N端抗体)D-荧光素钾盐Potassium (S)-2-(6-hydroxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4,5-dihydrothiazole-4-carboxylate化学标准品 分 子 式: C11H7N2O3S2-.K+ 分 子 量: 318.41318

CTAG1B/Cancer/testis antigen 1  /睾丸抗原1B醋酸棉酚1,1',6,6',7,7'-hexahydroxy-3,3'-dimethyl-5,5'-bis(1-methylethyl)[2,2'-binaphthalene]-8,8'-dicarboxaldehyde-acetic acid中药标准品  分 子 式: C30H30O8.C2H4O2 分 子 量: 578.61

ADAMTS8  整合素样金属蛋白酶与凝血酶8型抗体1-甲基哌嗪1-Methylpiperazine化学标准品 分 子 式: C5H12N2 分 子 量: 100.16218

PRRSV M protein  猪蓝耳病病毒M蛋白抗体海胆灵2,5-Piperazinedione,3-[[2-(1,1-dimethyl-2-propen-1-yl)-5,7-bis(3-methyl-2-buten-1-yl)-1H-indol-3-yl]methyl]-6-methyl-,(3S,6S)-对照药材 分 子 式: C29H39N3O2 分 子 量: 461.63886