PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

米根霉αHBDH (α-Hydroxybutyrate Dehydrogenase) ELISA Kit 拉丁属名: Rhizopus  oryzae

金针菇（黄）GLUT1 (Glucose Transporter 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌5-LO (Arachidonate 5-Lipoxygenase) ELISA Kit拉丁属名: coli

pCMV-Gluc12-LO (Arachidonate 12-Lipoxygenase) ELISA Kit规格: 1ml甘油管1支，20ul质粒，一般次日下午

围小丛壳菌15-LO (Arachidonate 15-Lipoxygenase) ELISA Kit拉丁属名: Glomerella cingulata

粉色小菇NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

楚科奇海科维尔氏菌BFP (Brain Finger Protein) ELISA Kit  拉丁属名: Colwellia chukchiensis

猪链球菌II型S100A8 (S100 Calcium Binding Protein A8) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

未定德研所菌S100A9 (S100 Calcium Binding Protein A9) ELISA Kit拉丁属名: Desemzia incerta

黑腐皮壳属S100A10 (S100 Calcium-binding Protein A10) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

弗氏柠檬酸杆菌PLA2G2D (Phospholipase A2, Group IID) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母cPLA2 (Phospholipase A2, Cytosolic) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

浅玫瑰链霉菌iPLA2 (Phospholipase A2, Calcium Independent ) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces roseolus

杨链格孢SAA2 (Serum Amyloid A2) ELISA Kit拉丁属名: Alternaria populi

耶纳农球菌 RTN4 (Reticulon 4) ELISA Kit 拉丁属名: Agrococcus jenensis
猫嗜衣原体探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Alpha-ENaC  钠通道蛋白α ENaC免疫染色一抗稀释液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PLAGL2  多形性腺瘤基因样蛋白2抗体芦荟苷aloin中药标准品  分 子 式: C21H22O9 分 子 量: 418.4

5HTR2C  5-羟色胺受体2C抗体曲札茋苷Piceatannol 3'-O-glucoside化学标准品 分 子 式: C20H22O9 分 子 量: 406.38328

ROM-K/KCNJ1  ATP调节钾离子通道ROM K抗体花椒毒酚7H-Furo[3,2-g][1]benzopyran-7-one,9-hydroxy-中药标准品  分 子 式: C11H6O4 分 子 量: 202.16294

Calsequestrin  肌钙集蛋白/收钙素抗体马来酸Maleic acid中药标准品  分 子 式: C4H4O4 分 子 量: 116.07216

Syncytin 1/HERV  合胞素1抗体酸枣仁皂苷BJujuboside B中药标准品  分 子 式: C52H84O21 分 子 量: 1045.21

TASK 3/KCNK9  酸敏感性钾离子通道蛋白抗体9-甲氧基喜树碱1H-Pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dione,4-ethyl-4-hydroxy-9-methoxy-, (4S)-中药标准品  分 子 式: C21H18N2O5 分 子 量: 378.38