PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

金黄壳囊孢S100A11 (S100 Calcium Binding Protein A11) ELISA Kit   注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

海角副球菌S100A7 (S100 Calcium Binding Protein A7) ELISA Kit  拉丁属名: Paracoccus homiensis

拟茎点霉S100B (S100 Calcium Binding Protein B) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

平田头菇S100A6 (S100 Calcium Binding Protein A6) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

广岛链霉菌S100A12 (S100 Calcium Binding Protein A12) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces hiroshimensis

硬杆菌SDH (Sorbitol Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter     scleromae

果生链核盘菌sPLA2 (Screted Phospholipase A2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

异常汉逊酵母变种SCT (Secretin) ELISA Kit  拉丁属名: Hansenula anomala var. anomala (Hansen) H. et P.

芬娜冬菇sIgA (Secretory Immunoglobulin A) ELISA Kit拉丁属名: Flammulina fennae

枯草芽胞杆菌枯草亚种SEPP1 (Selenoprotein P) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. subtilis

特异青霉（产黄青霉）SEMA7A (Semaphorin 7A) ELISA Kit  拉丁属名: Penicillium notatum Westling

血痕韧革菌STK (serine/threonine protein kinase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

盐古杆菌SAA (Serum amyloid A) ELISA Kit拉丁属名: Natrinema  sp.

高卢蜜环菌SESN1 (Sestrin 1) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球孢白僵菌SESN2 (Sestrin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Beauveria bassiana
头孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒规格eIF4EBP1/4EBP1  eIF4E结合蛋白抗体大麻烯Canniprene对照药材 分 子 式: C21H26O4 分 子 量: 342.42874

phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser64)  磷酸化4E结合蛋白1抗体商陆皂苷辛esculentoside H中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

phospho-eIF4EBP1(Thr37/46)  磷酸化4E结合蛋白1抗体乙酸钠溶液(3mol/L,pH4.8,RNase free)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

phospho-eIF4EBP1/4EBP1(Ser65/Thr70)  磷酸化eIF4E结合蛋白抗体对羟基苯甲醛4-Hydroxybenzaldehyde中药标准品  分 子 式: C7H6O2 分 子 量: 122.12134

phospho-EIF4EBP1(Ser100)  磷酸化eIF4E结合蛋白抗体美格鲁特N-BUTYLDEOXYNOJIRIMYCIN中药标准品  分 子 式: C10H21NO4 分 子 量: 219.27804

phospho-EIF4EBP1(Ser111)  磷酸化eIF4E结合蛋白抗体岩大戟内酯Ejolkinolide E化学标准品 分 子 式: C20H28O2 分 子 量: 300.435

EIF5  真核翻译起始因子5抗体美商陆酸Olean-12-ene-28,29-dioicacid, 3,23-dihydroxy-, 29-methyl ester, (3b,4a,20b)-中药标准品  分 子 式: C31H48O6 分 子 量: 516.70922