PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

孔曲霉DPP4 (Dipeptidyl Peptidase IV) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  ostianus

枯草芽孢杆菌枯草亚种EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. subtilis

炭黑曲霉PACAP (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  carbonarius

蜡状芽孢杆菌5-HETE (5-Hydroxyeicosatetraenoic Acid) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

弗氏柠檬酸菌CALP (Calprotectin) ELISA kit拉丁属名: Citrobacter  freundii

解脂复膜孢酵母（亚罗解脂酵母）ANXA5 (Annexin A5) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomycopsis lipolytica（YarrowYarrowia lipolytica）

鲍鱼菇GPIb-IX-V (Platelet Membrane Glycoprotein GPIb-IX-V Complex) ELISA Kit拉丁属名: Pleurotus  abalonus

粉红单端孢霉SCARB1 (Scavenger receptor class B member 1) ELISA kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

猪丝菌IL-25 (Interleukin 25) ELISA Kit拉丁属名: rhuriopathiae

玉米大斑病菌POSTN/OSF-2 (Periostin) ELISA Kit  拉丁属名: Setosphaeria tuicicum

厚垣孢普可尼亚菌BAFF/CD257 (B-Cell Activating Factor) ELISA Kit用途: 用作生物防治研究

米兰农霉菌NFκB2 (Nuclear Factor Kappa B2) ELISA Kit拉丁属名: Agromyces mediolanus

墨西哥假黄色单胞菌RELB (V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog B) ELISA Kit拉丁属名: Pseudoxanthomonas mexicana

枯草芽孢杆菌PDPN (Podoplanin) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

细黄链霉菌PCT (Procalcitonin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
节瘤拟杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 KIST/UHMK1  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶KIST抗体（激酶相互作用与相关基因）D-Hanks平衡盐粉剂(1×,含酚红)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NEK3  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Nek3抗体蛇纹石素Serpentine对照药材 分 子 式: C21H22N2O3 分 子 量:

TRIB2  MAPK调控蛋白TRB2抗体香豆素2H-Chromen-2-one中药标准品  分 子 式: C9H6O2 分 子 量: 146.14274

TTBK1/BDTK  脑源性tau蛋白激酶抗体葡萄糖-Tris-EDTA溶液(GTE)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

EMP2  上皮细胞膜蛋白2抗体蔗糖溶液(50%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

HEF1  蛋白激酶底物相关蛋白抗体14-hydroxy sprengerinin C(3beta,25R)-14-Hydroxyspirost-5-en-3-yl O-6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl-(1-2)-O-[beta-D-xylopyranosyl-(1-4)]-beta-D-glucopyranoside中药标准品  分 子 式: C44H70O17 分 子 量: 871.0164

Brk/PTK6  酪氨酸蛋白激酶6(激酶)二氢尼洛替星Lanost-7-ene-3,23-diol,24,25-epoxy-, (3b,13a,14b,17a,20S,23R,24S)-对照药材 分 子 式: C30H50O3 分 子 量: