PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

红根须腹菌TNFRSF1A (Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1A) ELISA Kit用途: 属外生菌根菌

南极类芽孢杆菌MDH1 (Malate Dehydrogenase 1) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus antarcticus

芽孢杆菌Ta1 (Thymosin-α1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  tarimensis

米串珠镰孢LEPR (Leptin Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium moniliforme var. oryzae

灰平链霉菌PCIII (Procollagen III) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces  griseoplanus

需钠弧菌fT3 (Free Triiodothyronine) ELISA Kit拉丁属名: Vibrio natriegens

油菜菌核病菌5-HIAA (5-Hydroxyindolacetic Acid) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌FLAP (5-Lipoxygenase Activating Protein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

围小丛壳菌PON1 (Paraoxonase 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

平菇—法无孢DNMT1 (DNA Methyltransferase 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌SIRT1 (NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

香菇SCUBE1 (Signal Peptide, CUB and EGF-like Domain-containing Protein 1)ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

美澳型核果褐腐病菌FNDC5 (Fibronectin type III domain-containing protein 5) ELISA kit拉丁属名: Monilinia fructicola

柠檬色小单孢菌GNMT (Glycine N-methyltransferase) ELISA kit拉丁属名: Micromonospora citrea

Sphingobacterium compostiHSD11β1 (11-Beta-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1) ELISA kit拉丁属名: Sphingobacterium composti
节片代凡探针法荧光定量PCR试剂盒说明书RORG/ROR gamma  维甲酸相关孤儿受体γ抗体内源性亲和素-生物素封闭试剂盒标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

AF6/Afadin  丝状肌动蛋白结合蛋白抗体鹤庆五味子辛素Schisanwilsonin H化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

phospho-Afadin(Ser1718)  磷酸化丝状肌动蛋白结合蛋白抗体野马追内酯AEupalinolide B中药标准品  分 子 式: C24H30O9 分 子 量: 463.20

TRIM31  环指蛋白HCG1抗体乙酰基异柏烯酸methyl (1S,4aS,5R,8aR)-5-[(E)-5-acetyloxy-3-methyl-pent-3-enyl]-4a-methyl-6-methylidene-decalin-1-carboxylate对照药材 分 子 式: C22H34O4 分 子 量: 362.50296

alpha-L-arabinofuranosidase  果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗体9-羟基-13E-赖百当烯-15-酸9-Hydroxy-13E-labden-15-oic acid化学标准品 分 子 式: C20H34O3 分 子 量: 322.48216

THRA1  甲状腺激素受体α1抗体石吊兰甲素Lysionotin中药标准品  分 子 式: C18H16O7 分 子 量: 344.31544

THRA1+2  甲状腺激素受体α1+α2抗体雷公藤新碱8,11-Epoxy-9,12-ethano-11,15-methano-5H,11H-[1,9]dioxacyclooctadecino[4,3-b]pyridine-5,17(18H)-dione,10,13,14,22,23-pentakis(acetyloxy)-12-[(acetyloxy)methyl]-7,8,9,10,12,13,14,15,19,20-decahydro-21-hydroxy-8,18,21-trimethyl-,(8R,9R,10R,11S,12R,13R,14R,15S,18S,21S,22S)-化学标准品 分 子 式: C38H47NO18 分 子 量: