PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

弗雷德里克斯堡假单胞菌TIE-2 (Tyrosine Kinase With Immunoglobulin-Like And EGF-Like Domains 2) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas frederiksbergensis

小奥德蘑U-T4 (Ultrasensitivity Thyroxine) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

三骨菇U-T3 (Ultrasensitivity Triiodothyronine) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

桔青霉NFE2L2 (Nuclear Factor, Erythroid Derived 2 Like Protein 2) ELISA Kit  拉丁属名: Penicillium citrinum

喜寒犁头霉PLAU/uPA(Urokinase-Type Plasminogen Activator) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

胡椒枯萎病PLAUR/uPAR (Plasminogen Activator, Urokinase Receptor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

短小芽孢杆菌VEGF-B (Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  pumilus

笔状地霉VEGF-C (Vascular Endothelial Cell Growth Factor C) ELISA Kit拉丁属名: Geotrichum penicillatum

大肠埃希菌VEGF-D (Vascular Endothelial Cell Growth Factor D) ELISA Kit拉丁属名: coli

链霉菌VEGFR-2/KDR (Vascuoar Endothelial Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit用途: 产生代谢产物具有抑菌活性

大肠埃希氏菌VCAM-1 (Vascuolar Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

黄芪叶杆菌VIP (Vasoactive Intestinal Peptide) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

红缘拟层孔菌VLA (Very Late Appearing Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Fomitopsis pinicola

运动张树政氏菌FOS (V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Zhangella mobilis

奇异变形杆菌49005HRAS (V-Ha-Ras Harvey Sarcoma Viral Oncogene Homolog) ELISA Kit 规格: 冻干粉
质型多角体病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 phospho-LSP1 (Ser204)  磷酸化白细胞F肌动蛋白结合蛋白抗体(S,E)-癸-2,9-二烯-4,6-二炔-1,8-二醇(S)-Deca-2,9-dien-4,6-diyne-1,8-diol对照药材 分 子 式: C10H10O2 分 子 量: 162.1852

AEBP1  脂肪细胞增强结合蛋白1Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH8.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CARD11  凋亡加强结构域蛋白11抗体7-羟基千金子二萜醇7β-Hydroxylathyrol中药标准品  分 子 式: C20H30O5 分 子 量: 350.4492

CIKS  核因子NFκB激活蛋白1抗体黄芪皂苷IAstragaloside I中药标准品  分 子 式: C43H68O16 分 子 量: 840.990420000001

MYBBP1A/p53 activated protein 2  p53激活蛋白2抗体Tris-EDTA缓冲液(10×TE,pH8.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NCKAP1  膜相关的蛋白质HEM2抗体ABTS缓冲液(pH5.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TMED4  跨膜蛋白TMED4抗体DNA碱性转移缓冲液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: