PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

糙孢篮状菌M2-PK (Pyruvate Kinase,M2) ELISA Kit拉丁属名: Talaromyces trachyspermus

嗜中温寒冷杆菌GAP (Ras Gtpase Activating Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Frigoribacterium mesophilum

硬毛栓孔菌NRG-2 (Neuregulin 2) ELISA Kit拉丁属名: Trametes trogii

酿酒酵母RANκL (Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

产气列契瓦尼尔氏菌GHRL (Ghrelin) ELISA Kit拉丁属名: Lechevalieria aerocolonigenes

葡萄座腔菌REG1α (Regenerating Islet Derived Protein 1 Alpha) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

砖色栖砂杆菌REG4 (Regenerating Islet Derived Protein 4) ELISA Kit 拉丁属名: Arenibacter latericius

冷温木拉克酵母RANTES (Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit 拉丁属名: Mrakia frigida

奥氏蜜环菌RGS4 (Regulator Of G Protein Signaling 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

菊异茎点霉RXFP1 (Relaxin/Insulin Like Family Peptide Receptor 1) ELISA Kit拉丁属名: Paraphoma chrysanthemicola

白色金针菇RSV-IgA (Respiratory Syncytial Virus IgA)  ELISA Kit用途: 食用

鸡伤寒沙门氏菌RSV- IgD (Respiratory Syncytial Virus IgD)  ELISA Kit拉丁属名: gallinarum

深红沙雷氏菌RSV- IgG (Respiratory Syncytial Virus  IgG) ELISA Kit拉丁属名: Serratia rubidaea

尖孢镰孢RSV- IgM (Respiratory Syncytial Virus IgM) ELISA Kit拉丁属名: Fusarium oxysporum

茶藨子葡萄座腔菌RBP4 (Retinol Binding Protein 4, Plasma) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
蛇形隐孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒 SEZ6L  样相关蛋白6抗体2alpha-羟基-3beta-乙酰白桦酸2alpha-hydroxy-3beta-acetoxy-19beta-hydrogen-lup-20(29)-en-28-oic acid化学标准品 分 子 式: C32H50O5 分 子 量: 514.736

SHPRH  组蛋白连接作用蛋白抗体蔗糖溶液(2mol/L)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SIRT3  线粒体乙酰化酶3抗体黄芩素Baicalein中药标准品  分 子 式: C15H10O5 分 子 量: 270.24

SLC5A8  钠碘转运体蛋白8抗体漆黄素2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-3,7-dihydroxy-4H-chromen-4-one中药标准品  分 子 式: C15H10O6 分 子 量: 286.2363

HLTF  解旋酶样转录因子抗体氯化芍药素-3-O-半乳糖苷1-Benzopyrylium, 3-(β-D-galactopyranosyloxy)-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-, chloride (1:1)化学标准品 分 子 式: C22H23O11+.Cl- 分 子 量: 498.86442

SNF5  转录调控激活蛋白SNF5抗体2''-O-p-反式香豆酰基荭草苷Orientin 2''-O-p-trans-coumarate中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

SPARCL1/Ecm2  细胞外基质蛋白2抗体圆锥定 CPaniculidine C对照药材 分 子 式: C15H18O5 分 子 量: