PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

构巢曲霉OFQ/N (Orphanin FQ/Nociceptin) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus nidulans

李季伦氏环杆菌GROβ (Growth Regulated Oncogene Beta) ELISA Kit拉丁属名: Cyclobacterium lianum

紫色游动放线菌GROγ (Growth Regulated Oncogene Gamma) ELISA Kit拉丁属名: Actinoplanes violaceus

蓝绿小四孢菌OSCAR (Osteoclast Associated Receptor) ELISA Kit用途: 代谢产物具有活性。

根瘤菌ODF (Osteoclast Differentiation Factor) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

百脉根中间根瘤菌OSF (Osteoclast Stimulating Factor 1) ELISA Kit拉丁属名: Mesorhizobium  loti

黑曲霉ON (Osteonectin) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus niger

纳西杆菌属OPN (Osteopontin) ELISA Kit  拉丁属名: Naxibacter

乳酸乳球菌乳亚种OPGL (Osteoprotegerin Ligand) ELISA Kit拉丁属名: Lactococcus  lactis subsp.lactis

棘孢曲霉ACH (Acetylcholine) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  aculeatus

绛红链霉菌OVA SIgM (Ovalbumin Specific IgM) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces purpureus

表皮葡萄球菌OVA sIgE (Ovalbumin specific Immunoglobulin E) ELISA Kit拉丁属名: Staphylococcus  epidermidis

色盐杆菌CA125 (Carbohydrate Antigen 125) ELISA Kit拉丁属名: Chromohalobacter  pacificum

球形赖氨酸芽孢杆菌Tryptophan Hydroxylase 1(TPH1) ELISA Kit拉丁属名: Lysinibacillus sphaericus

粗糙脉孢菌OLAb (Oxidized Lowdensity Lipoprotein Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Neurospora crassa
反刍兽考德里氏体探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CD200/MOX1  膜糖蛋白CD200抗体巨豆三烯酮4-(But-2-en-1-ylidene)-3,5,5-trimethylcyclohex-2-enone中药标准品  分 子 式: C13H18O 分 子 量: 190.28142

CD66c/CEACAM6  癌胚抗原相关细胞粘附分子抗体异石当归素Isosaxalin对照药材 分 子 式:  分 子 量:

CPA1/Carboxypeptidase A  胰羧肽酶A1抗体五水合硫酸司巴丁(-)-Sparteine sulfate pentahydrate中药标准品  分 子 式: C15H26N2.H2O4S 分 子 量: 332.45882

CPA2/Carboxypeptidase A2  羧肽酶A2抗体STM溶液(2M,pH7.4)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CPB1/Carboxypeptidase B1  胰羧肽酶B1抗体4'-O-甲基葛根素4'-O-Methylpuerarin中药标准品  分 子 式: C22H22O9 分 子 量: 430.40468

CPEB1  细胞质多聚腺苷酸结合蛋白1抗体(-)-荷包牡丹碱甲氯化物1,3-Dioxolo[4,5-g]isoquinolinium,5-[(6S)-6,8-dihydro-8-oxofuro[3,4-e]-1,3-benzodioxol-6-yl]-5,6,7,8-tetrahydro-6,6-dimethyl-,chloride (1:1), (5R)-化学标准品 分 子 式: C21H20NO6+.Cl- 分 子 量: 417.8396

Cystatin E/M  半胱氨酸蛋白酶抑制剂6抗体11-羰基-Β-乙酰乳香酸Acetyl-11-keto-beta-boswellic acid中药标准品  分 子 式: C32H48O5 分 子 量: 512.72052