PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

大肠杆菌SHH (Hedgehog Homolog, Sonic) ELISA Kit 用途: For replication of R6K plasmids. 用于构建大肠杆菌突变株。

PseudoxanthomonasHHIP (Hedgehog Interacting Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudoxanthomonas sp.

绒奥德蘑HLTF (Helicase Like Transcription Factor) ELISA Kit 用途: 食用

斑点青霉Hp-IgG (Helicobacter Pylori IgG) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

耐寒短杆菌HO-1 (Heme Oxygenase 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

圈卷产色链霉菌HO-2 (Heme Oxygenase 2) ELISA Kit用途: 代谢产物具有抗菌活性。

炭疽健康皮张抗原HPX (Hemopexin) ELISA Kit 规格: 10ml

凝结芽胞杆菌HSPG (Heparan Sulphate Proteoglycan) ELISA Kit  拉丁属名: Bacillus coagulans

巨大芽孢杆菌HPA (Heparanase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus megaterium

雅致放射毛霉HBEGF (Heparin Binding Epidermal Growth Factor Like Growth Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Actinomucor elegans

解淀粉芽孢杆菌HC II (Heparin Cofactor II) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus amyloliquefaciens

微小根毛霉LIPC (Lipase, Hepatic) ELISA Kit拉丁属名: Rhizomucor pusillus

根瘤菌HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit 用途: 固氮

毕赤酵母HNF1a (Hepatocyte Nuclear Factor 1 Alpha) ELISA Kit 用途: 表达脂肪酶

斯瓦特贝赫山克里布所菌HNF4a (Hepatocyte Nuclear Factor 4 Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Kribbella swartbergensis
短古柏线虫探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Calponin 1/2/3  钙结合蛋白Calponin抗体L（-）岩藻糖L-(-)-Fucose碳水化合物  分 子 式: C6H12O5 分 子 量: 164.15648

SORBS2/ArgBP2  精氨酸结合蛋白2抗体桧脂素，洒维宁Hibalactone对照药材 分 子 式: C20H16O6 分 子 量:

SLC40A1/FPN1  细胞膜铁转运蛋白FP1抗体23-羟基白桦酸23-HYDROXYBETULINIC ACID中药标准品  分 子 式: C30H48O4 分 子 量: 472.69972

TGF beta 3  转移生长因子β3（TGFβ3）抗体楮树黄酮醇B2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-methoxy-6,8-bis(3-methylbut-2-en-1-yl)-4H-chromen-4-one化学标准品 分 子 式: C26H28O7 分 子 量: 452.49632

TGF beta 1/LAP  转化生长因子β（TGFβ）抗体(E)-3-乙酰氧基-5-甲氧基二苯乙烯3-Methoxy-5-styrylphenyl acetate对照药材 分 子 式: C17H16O3 分 子 量: 268.30714

TGF beta 2  转化生长因子β2（TGFβ2）抗体8-乙酰甲基二氢勒樘碱8-Acetonyldihydroavicine化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

MCSF/M-CSF  巨噬细胞克隆刺激因子抗体11β-羟基黄体酮Pregn-4-ene-3,20-dione,11-hydroxy-, (11b)-化学标准品 分 子 式: C21H30O3 分 子 量: