PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

云芝栓孔菌 (变色栓菌)GCP-2 (Granulocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit 拉丁属名: Trametes versicolor

假单胞菌G-CSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

罗伊氏乳杆菌Gzms-A (Granzymes A) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  reuteri

大斑凸脐蠕孢Gzms-B( Granzymes B) ELISA Kit拉丁属名: Exserohilum turcicum

喜乳糖拟泡囊担孢酵母GREM1 (GremLin 1) ELISA Kit 拉丁属名: Cystobasidiopsis lactophilus

谷氨酸棒杆菌Ⅲ型GDF1 (Growth Differentiation Factor 1) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

大肠埃希菌GDF2 (Growth Differentiation Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: coli

黑附球菌GDF3 (Growth Differentiation Factor 3) ELISA Kit拉丁属名: Epicoccum nigrum Link

无花果曲霉GDF5 (Growth Differentiation Factor 5) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  ficuum

锈赤蜡黄链霉菌GDF9 (Growth Differentiation Factor 9) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces rubiginosohelvolus

膜醭假丝酵母GDF11 (Growth Differentiation Factor 11) ELISA Kit拉丁属名: Candida membranifaciens

碱线菌属GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit 拉丁属名: Natrinema  sp

Rhizobium multihospitium GRB10 (Growth Factor Receptor Bound Protein 10) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

甘蔗生节棱孢GRB14 (Growth Factor Receptor Bound Protein 14) ELISA Kit拉丁属名: Arthrinium saccharicola

根瘤菌GRB2 (Growth Factor Receptor Bound Protein 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
鸽病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 Hepatitis C Virus RNA-directed RNA polymerase  病毒NS4B（65kDa）抗体羧苄青霉素溶液(Carbenicillin,50mg/ml)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

SORBS2/ArgBP2  精氨酸结合蛋白2抗体β-蒎烯(1S,5S)-6,6-Dimethyl-2-methylenebicyclo[3.1.1]heptane化学标准品 分 子 式: C10H16 分 子 量: 136.23404

BNP  脑钠素/利钠肽抗体洋紫苏醇B1H-Naphtho[2,1-b]pyran-1-one,6-(acetyloxy)-3-ethenyldodecahydro-5,10,10b-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-,(3R,4aR,5S,6S,6aS,10S,10aR,10bS)-对照药材 分 子 式: C22H34O7 分 子 量: 410.50116

p70 S6 kinase beta  核糖体蛋白S6激酶1抗体酒石酸长春质碱化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

CD20  CD20抗体原苏木素B(7S)-3,7,10,11-Tetrahydroxy-7,8-dihydro-6H-dibenzo[b,d]oxocin-7-methanol中药标准品  分 子 式: C16H16O6 分 子 量: 304.29464

Complement C3 beta chain  补体C3b抗体土克甾酮Cholest-7-en-6-one,2,3,11,14,20,22,25- heptahydroxy-,(2a,3a,5a,11R,22R)- 中药标准品  分 子 式: C27H44O8 分 子 量: 496.63346

C3a/C3a anaphylatoxin  补体C3a过敏毒素抗体氯化锦葵色素-3-O-半乳糖苷1-Benzopyrylium, 3-(b-D-galactopyranosyloxy)-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-,chloride (1:1)化学标准品 分 子 式: C23H25O12+.Cl- 分 子 量: 528.8904