PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

宋内氏志贺氏菌51592F-TESTO (Free Testoterone) ELISA Kit规格: 冻干粉

谢瓦曲霉fT4 (Free Thyroxine) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus chevalieri

*蜜环菌FSH (Follicle Stimulating Hormone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

紫穗槐根瘤菌FUCA (Alpha-L-Fucosidase, Tissue) ELISA Kit用途: 与紫穗槐共生固氮

白地霉GNb1 (G Protein Beta 1) ELISA Kit拉丁属名: Geotrichum  candidum

鲁氏不动杆菌GLβ (Galactosidase, Beta) ELISA Kit拉丁属名: Acinetobacter lwoffii

绳状篮状菌FASN (Fatty Acid Synthase) ELISA Kit拉丁属名: Talaromyces funiculosus

青霉菌GAL (Galanin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

乳酸乳球菌乳脂亚种GAL1 (Galectin 1) ELISA Kit 拉丁属名: Lactococcus  lactis subsp. cremoris

球孢链霉菌高加索变种GAL2 (Galectin 2) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces globisporus var. caucasicus

产氨短杆菌GAL3 (Galectin 3) ELISA Kit拉丁属名: Brevibacterium ammoniagenes (Cooke and Keith) Breed

运动发酵单胞菌GAL4 (Galectin 4) ELISA Kit拉丁属名: Zymomonas  mobilis

杜擀氏菌GAL7 (Galectin 7) ELISA Kit拉丁属名: Duganella phyllosphaerae

豌豆根瘤菌GAL8 (Galectin 8) ELISA Kit用途: 与豌豆共生固氮

淡紫灰链霉菌GAL9 (Galectin 9) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
波萨达斯球孢子菌探针法荧光定量PCR试剂盒 USP3  去泛素化酶3抗体氨茶碱Aminophylline化学标准品 分 子 式: 2(C7H8N4O2).C2H8N2 分 子 量: 420.43

ATXN3L  小脑脊髓蛋白3抗体蝙蝠葛新诺林碱Dauricinoline中药标准品  分 子 式: C37H42N2O6 分 子 量: 610.73918

Endomucin  内皮粘蛋白EMCN抗体藤黄酸Morellic acid化学标准品 分 子 式: C33H36O8 分 子 量: 560.63414

KLK3/Prostate Specific Antigen  激肽释放酶3/舒素3抗体蛋白银染试剂盒标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

H5N1-H5  H5亚型全病毒抗体19,20-(E)-瓦来萨明碱2,5-Ethano-2H-azocino[4,3-b]indole-6-carboxylicacid, 4-ethylidene-1,3,4,5,6,7-hexahydro-6-(hydroxymethyl)-, methyl ester,(2R,4E,5S,6S)-化学标准品 分 子 式: C20H24N2O3 分 子 量: 340.41616

Newcastle disease virus  鸡新城疫疫苗（鸡瘟4型混合病毒）抗体交让木碱1-Propanone,1-[(1R,4R,5S)-1,4-dimethyl-2,8-dioxabicyclo[3.2.1]oct-4-yl]-3-[(3aR,4S,4aS,5R,8S,8aR,8bS,10S)-octahydro-8-methyl-5-(1-methylethyl)-4,8,3a-[1,2,4]butanetriylcyclopent[b]indol-8a(4aH)-yl]-对照药材 分 子 式: C30H47NO3 分 子 量:

CD3 epsilon  CD3抗体小檗碱Berberine中药标准品  分 子 式: C20H18NO4+ 分 子 量: 336.36122