PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

红色红曲CFB (Complement Factor B) ELISA Kit 拉丁属名: Monascus  ruber

大肠埃希菌CFH (Complement Factor H) ELISA Kit拉丁属名: coli

黄叉曲霉C3a (Complement Component  3a) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  flavo-furcatis

大肠埃希菌C4a (Complement Component  4a) ELISA Kit拉丁属名: coli

（镰刀菌）DG4C* (Complement Component  *) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

虫草属CTGF (Connective Tissue Growth Factor) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

长双歧杆菌CX26 (Connexin 26) ELISA Kit 拉丁属名: Bifidobacterium  longum

干草鞘氨单胞菌CX31 (Connexin 31) ELISA Kit拉丁属名: Sphingomonas faeni

猪丝菌CX37 (Connexin 37) ELISA Kit拉丁属名: rhuriopathiae

枯草芽孢杆菌CX40 (Connexin 40) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

香菇CX43 (Connexin 43) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

红栓菌CNTN1 ( Contactin 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

假黄色杆菌属CNTN2 ( Contactin 2) ELISA Kit拉丁属名: Pseudoxanthobacter sp.

杂色曲霉CNTN3 ( Contactin 3) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus versicolor

卢森坦类诺卡氏菌CNTN4( Contactin 4) ELISA Kit拉丁属名: Nocardiopsis lucentensis
产气荚膜梭状芽孢杆菌B型探针法荧光定量PCR试剂盒 AEV polyprotein  禽脑脊髓炎病毒AEV抗体大花双参苷A化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

EBNA 3B  EB病毒核抗原-3B抗体过碘酸溶液(1%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ADFP  脂肪组织分化相关蛋白抗体灵芝烯酸ALanosta-8,20(22)-dien-26-oicacid, 7,15-dihydroxy-3,11,23-trioxo-, (7b,1*,20E)-化学标准品 分 子 式: C30H42O7 分 子 量: 514.65028

LMP2A  EB病毒LMP-2A蛋白抗体苯甲酰胺Benzamide对照药材 分 子 式: C7H7NO 分 子 量: 121.13658

ADAM2  去整合素样金属蛋白酶2抗体原人参三醇Protopanaxatriol中药标准品  分 子 式: C8H10N2S2 分 子 量: 198.3084

MLCK  肌球蛋白轻链激酶抗体Cimiracemoside DCimiracemoside D中药标准品  分 子 式: C37H58O11 分 子 量: 678.85

Acetyl-Histone H4(K5)  乙酰化组蛋白H4抗体木通苯乙醇苷BCalceorioside B中药标准品  分 子 式: C23H26O11 分 子 量: 478.44594