PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

皮伞PYY (Peptide YY) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

波那雷恩沙门氏菌SOD1 (Superoxide Dismutase 1, Soluble) ELISA Kit拉丁属名: Salmonella  bonariensis

运动节杆菌IgG2b (Immunoglobulin G2b) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter agilis

雅致小克银汉霉IgG2c (Immunoglobulin G2c) ELISA Kit拉丁属名: Cunninghamella elegans

蝉花1-9IgG3 (Immunoglobulin G3) ELISA Kit拉丁属名: Isaria cicadae Miq.

枯草芽胞杆菌FABP1 (Fatty Acid Binding Protein 1, Liver) ELISA Kit用途: 活菌口服剂,、

氧化微杆菌FABP3 (Fatty Acid Binding Protein 3, Muscle and Heart) ELISA Kit拉丁属名: Microbacterium oxydans

淤泥大洋芽孢杆菌FABP4 (Fatty Acid Binding Protein 4, Adipocyte) ELISA Kit拉丁属名: Oceanobacillus caeni

酿酒酵母αFP (Alpha-Fetoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

毛木耳(紫木耳、黄背木耳)CSTA (Cystatin A)  ELISA Kit 拉丁属名: Auricularia polytricha (Mont.) Sacc.

金针菇P-Cadherin (Cadherin, Placental) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

穿孔素假单胞菌PCDH15 (Protocadherin 15) ELISA Kit  拉丁属名: Pseudomonas  pertucinogena

嗜淀粉乳杆菌PDPN (Podoplanin) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus amylophilus

枯草芽孢杆菌NFκB2 (Nuclear Factor Kappa B2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

链格孢BMG/β2-MG (Beta-2-Microglobulin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
嗜衣原体探针法荧光定量PCR试剂盒 PASK/STK39  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶39抗体阿朴-12'-番茄红素醛Apo-12’-lycopenal中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

HES1  转录因子HES-1抗体Hollande固定液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Factor VIII  第八因子抗体TEN缓冲液(1×,pH8.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Noggin  指(趾)关节粘连NOG蛋白抗体川陈皮素Nobiletin中药标准品  分 子 式: C21H22O8 分 子 量: 402.39

GGT1/CD224  γ谷氨酰转移酶抗体结晶紫饱和甲醇溶液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TAGL2/TAGLN2  细胞骨架相关蛋白2抗体尿嘧啶Pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione中药标准品  分 子 式: C4H4N2O2 分 子 量: 112.08676

Peroxiredoxin 2/PRXII  硫氧还蛋白过氧化物酶Ⅱ/巯基抗氧化蛋白抗体马兜铃酸AAristolochic acid中药标准品  分 子 式: C17H11NO7 分 子 量: 341.27