PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

谷氨酸棒杆菌PDGFB (Platelet Derived Growth Factor Subunit B) ELISA Kit  拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

大肠埃希菌PF3 (Platelet Factor 3)  ELISA Kit拉丁属名: coli

黄曲霉PF4 (Platelet Factor 4) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  flavus

豌豆根瘤菌GPⅡbⅢa (Platelet Membrane Glycoprotein ⅡbⅢa) ELISA Kit拉丁属名: Rhizobium leguminosarum

脆泊氏孔菌PECAM1 (Platelet/Endothelial Cell Adhesion Molecule 1) ELISA Kit  拉丁属名: Postia fragilis

粪锈伞PDGFsR-α (Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

意大利青霉PDGF (Platelet-Derived Growth Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium  italicum

青海海境芽孢杆菌PHLDA2 (Pleckstrin Homology Like Domain Family A Member 2) ELISA Kit  拉丁属名: Paraliobacillus quinghaiensis

直丝紫链霉菌PTN (Pleiotrophin) ELISA Kit   拉丁属名: Streptomyces rectiviolaceus

植物乳杆菌PCX (Podocalyxin) ELISA Kit  拉丁属名: Lactobacillus plantarum

圈卷产色链霉菌浅色变种PVRL1 (Poliovirus Receptor Related Protein 1) ELISA Kit  拉丁属名: Streptomyces ansochromogenes var. pallens

 pGFP4412PVRL2 (Poliovirus Receptor Related Protein 2) ELISA Kit  用途: 研究

球色单隔孢属PVRL3 (Poliovirus Receptor Related Protein 3) ELISA Kit   注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母PC4 (activated RNA polymerase II transcription cofactor 4 ) ELISA Kit  拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

PA (Prealbumin) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus atrophaeus Nakamura
山羊病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒供应商streptomycin/OVA  链霉素偶联鸡卵白蛋白枸杞多糖中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

Metronidazole/OVA  甲硝唑偶联鸡卵白蛋白8-甲氧基山奈酚; 8-甲氧基莰非醇Sexangularetin化学标准品 分 子 式: C28H32O16 分 子 量: 624.54408

Metronidazole/BSA  甲硝唑偶联牛血清白蛋白苍术素Atractylodin中药标准品  分 子 式: C13H10O 分 子 量: 182.22

Morphine/KLH  *与血蓝蛋白偶联物卫矛醇(2R,3S,4R,5S)-Hexane-1,2,3,4,5,6-hexaol中药标准品  分 子 式: C6H14O6 分 子 量: 182.17176

Metronidazole/KLH  甲硝唑偶联牛血蓝蛋白十九酸Nonadecanoic acid化学标准品 分 子 式: C19H38O2 分 子 量: 298.50382

Morphine/BSA  *与牛血清白蛋白偶联物DL-精氨酸DL-Arginine中药标准品  分 子 式: C6H14N4O2 分 子 量: 174.20096

TRF(transferrin)  转铁蛋白Tris-甘氨酸电泳粉剂(5×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: