PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

酿酒酵母HAase (Hyaluronidase) ELISA Kit  拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

糙皮侧耳HIF-1α (Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Pleurotus ostreatus

佐久氏沙雷氏菌ID(deiodinase) ELISA Kit拉丁属名: Serratia marcescens

总状毛霉IgG-Fc ELISA Kit 拉丁属名: Mucor racemosus Fresenius

酿酒酵母IgA (Immunoglobulin A) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

稻黑孢霉IgE (Immunoglobulin E) ELISA Kit拉丁属名: Nigrospora oryzae

缺陷短波单胞菌IgG (Immunoglobulin G) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas  diminuta

无IgG1 (Immunoglobulin G1) ELISA Kit拉丁属名: Starmerella  bombicola

灵芝(红芝，赤芝)（可订购）IgG2a (Immunoglobulin G2a) ELISA Kit拉丁属名:  Ganoderma Lucidum (Leysser : Fries) Karsten

孟氏假单胞菌IgM (Immunoglobulin M) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas mandelii

刺孢吸水链霉菌NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit用途: 产正放线酮，可防治多种植物真菌病害

白井盘多毛孢INHA (Inhibin A) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

凝结芽胞杆菌INHB (Inhibin B) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus coagulans

金产色链霉菌INHbA (Inhibin Beta A) ELISA Kit  拉丁属名: Streptomyces aureochromogenes

虫草属INHBP (Inhibin Binding Protein) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
犬腺体病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒规格MSH2 (mutS homolog 2)  MSH2抗原3,4-二羟基苯乙酸3,4-dihydroxyphenylacetic acid中药标准品  分 子 式: C8H8O4 分 子 量: 168.14672

NKR(Neuromedin B Receptor)  神经激肽B受体（抗原）刺槐双氢黄酮4H-1-Benzopyran-4-one,2,3-dihydro-7-hydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-, (2S)-对照药材 分 子 式: C15H12O6 分 子 量: 288.25218

NF-L(Neurofilament triplet L)  低分子量神经丝蛋白（抗原）邻苯二甲酸二异丙酯1,2-Benzenedicarboxylicacid, 1,2-bis(1-methylethyl) ester 高端化学试剂 分 子 式: C14H18O4 分 子 量: 250.29032

NF-M (Neurofilament triplet M)  中分子量神经丝蛋白（抗原）P:C(1:1,pH﹤5.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NF-H(Neurofilament triplet H)  高分子量神经丝蛋白(抗原)柠檬烯dipentene其它化学试剂 分 子 式: C10H16 分 子 量: 136.23

NIS(Na+/I-symporter;NIS)  钠碘转运体蛋白（多肽抗原）雪松素Cedrin化学标准品 分 子 式: C15H18O6 分 子 量: 294.29982

NFKBp65(p65 NF-kappa B;p65NFKB)  细胞核因子或称k基因结合核因子(多肽抗原)5-羟色胺盐酸盐3-(2-Aminoethyl)-1H-indol-5-ol hydrochloride中药标准品  分 子 式: C10H12N2O.HCl 分 子 量: 212.67602