PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

洁小菇CA125 (Carbohydrate Antigen 125) ELISA Kit用途: 资源真菌

杨奇青霉pIκBα (Phospho-Inhibitory Subunit of NF Kappa B Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium janczewskii

青色链霉菌OLAb (Oxidized Lowdensity Lipoprotein Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces glaucus

短芽孢杆菌MAPK14 (Mitogen Activated Protein Kinase 14) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus pumilus

苍黄链霉菌PP (Pancreatic Polypeptide) ELISA Kit  拉丁属名: Streptomyces luridus

橄榄链霉菌PTH (Parathyroid Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces olivaceus

E.coli DH5α λpirPTHR2 (Parathyroid Hormone Receptor 2) ELISA Kit  规格: 冰袋泡沫盒快递

细黄链霉菌PTHrP (Parathyroid Hormone Related Protein) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces microflavus

*茄链格孢Pax (Paxillin) ELISA Kit  用途: 植物病原菌

平菇1PDAP1 (PDGFA Associated Protein 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

镰毛霉PTD (Pentosidine) ELISA Kit拉丁属名: Mucor falcatus

炭疽芽孢杆菌PP (Pepsin) ELISA Kit拉丁属名: anthracis

拟热带假丝酵母PGA (Pepsinogen A) ELISA Kit  拉丁属名: Candida pseudotropicalis (Carlanii) Basgal

马克斯克鲁维酵母PGC (Pepsinogen C) ELISA Kit  拉丁属名: Kluyveromyces marxianus

酿酒酵母PIN4 (Peptidyl Prolyl Cis/Trans Isomerase NIMA Interacting 4 Protein) ELISA Kit  拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae
毛细线虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 PSCA  干细胞抗原DNA凝胶加样缓冲液(10×DNA Loading Buffer)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ADH/AVP peptide  抗激素/升压素抗原（和肽素）2,5,14-三乙酰氧基-3-苯甲酰基氧基-8,15-二羟基-7-异丁酰氧基-9-烟酰氧基氧基-6(17),11E-麻风树属二烯2,5,14-Triacetoxy-3-benzoyloxy-8,15-dihydroxy-7-isobutyroyloxy-9-nicotinoyloxyjatropha-6(17),11E-diene对照药材 分 子 式:  分 子 量:

PRRSV M protein  猪蓝耳病病毒M蛋白L-缬氨酸L-Valine化学标准品 分 子 式: C5H11NO2 分 子 量: 117.14634

Newcastle disease virus/HRP  鸡新城疫疫苗（鸡瘟4型混合病毒）偶联辣根过氧化物酶白当归素Byak-angelicin中药标准品  分 子 式: C17H18O7 分 子 量: 334.31

sIgA  大鼠分泌型IgA(抗原)苜蓿素5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-5,6-dihydro-4H-chromen-4-one对照药材 分 子 式: C17H16O7 分 子 量: 332.30474

Melamine/KLH  三聚氰胺与血蓝蛋白偶联物反式-异扁柏脂素Phenol,4,4'-[(1E,3S)-3-ethenyl-1-propene-1,3-diyl]bis-对照药材 分 子 式: C17H16O2 分 子 量: 252.30774

Melamine/BSA  三聚氰胺与牛血清白蛋白偶联物醋酸氯己定CHLOROHEXIDINE ACETATE化学标准品 分 子 式: C7H6O3 分 子 量: 625.55