PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

德沃斯氏菌ITGB3 (Integrin Beta 3) ELISA Kit拉丁属名: Devosia sp.

Burkholderia metallica Vanlaere et al.MIP-3β(Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit 用途: 固氮。

泡盛曲霉MIP-5 (Macrophage Inflammatory Protein 5) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus awamori

枯草芽孢杆菌MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

假单胞菌H4 (Histone H4) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas sp.

大茎点菌MHCI/H-2Ⅰ(Major Histocompatibility ComplexⅠ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

仁果丛梗孢MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ(Major Histocompatibility Complex-Ⅱ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ(Major Histocompatibility Complex-Ⅲ) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

美澳型核果褐腐病菌HAT (Histone Acetyltransferase) ELISA Kit拉丁属名: Monilinia fructicola

橄榄色盘多毛孢CA15-3 (Carbohydrate Antigen 15-3) ELISA Kit拉丁属名: Pestalotia olivacea

黑曲霉MMP-1 (Matrix Metalloproteinase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白地霉MMP-2 (Matrix Metalloproteinase 2) ELISA Kit拉丁属名: Geotrichum  candidum

岸海杆状菌MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit拉丁属名: Marinobacter litoralis

MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

肠杆菌属MMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit 拉丁属名: Enterobacter  sp.
犬诺瓦克病毒探针法荧光定量PCR试剂盒说明书PPAR Gamma (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma)  过氧化酶活化增生受体γ（抗原）哈巴俄苷Harpagosid中药标准品  分 子 式: C24H30O11 分 子 量: 494.4884

PP2Ac  蛋白磷酸酶4(抗原)7－羟基马兜铃酸A7-Hydroxyaristolochic acid A中药标准品  分 子 式: C13H12N4Os 分 子 量: 272.32558

Runx3  一种新发现的基因(抗原)石杉碱丙5,9-Methanocycloocta[b]pyridin-2(1H)-one,5-amino-11-ethenyl-5,6,9,10-tetrahydro-7-methyl-, (5R,9R,11R)- (9CI)化学标准品 分 子 式: C15H18N2O 分 子 量:

RRAD (Ras-related associated with diabetes )  RRAD(多肽抗原)大果桉醛 A5--1R--1--11S-7R--7-Hydroxy-3-3-7-11-tetramethyltricyclo-6-3-0-0-2-4-undec-11-yl--3-methylbutyl--2-4-6-trihydroxybenzene-1-3-dicarbaldehyde对照药材 分 子 式: C28H40O6 分 子 量: 472.6136

SDF-1/CXCL12 (stromal cell derived factor-1)  基质细胞衍生因子-1(抗原)鼠李糖L-rhamnose monohydrate中药标准品  分 子 式: C6H12O5.H2O 分 子 量: 182.17

shank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1)  shank1多肽抗原7-乙基喜树碱(S)-4,11-Diethyl-4-hydroxy-1H-pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinoline-3,14(4H,12H)-dione中药标准品  分 子 式: C22H20N2O4 分 子 量: 376.4052

slc22A17 (solute carrier famili 22)  溶质转运蛋白家族22成员17(多肽抗原)款冬酮2-Pentenoic acid,3-methyl-,(1S,3aR,5R,7S,7aS)-1-[(1R)-1-(acetyloxy)ethyl]octahydro-4-methylene-7-(1-methylethyl)-2-oxo-1H-inden-5-ylester, (2E)-化学标准品 分 子 式: C23H34O5 分 子 量: 390.51306