PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希菌GDF7 (Growth Differentiation Factor 7) ELISA Kit  拉丁属名: coli

DeinococcusGDF9 (Growth Differentiation Factor 9) ELISA Kit   拉丁属名: Deinococcus sp.

哈茨木霉GDF10 (Growth Differentiation Factor 10) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

淡紫拟青霉GDF11 (Growth Differentiation Factor 11) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

镰刀菌GDF15 (Growth Differentiation Factor 15) ELISA Kit  用途: 教学科研

发酵乳杆菌Grb2 (Growth Factor Receptor Bound Protein 2) ELISA Kit  拉丁属名: Lactobacillus  fermentum

球毛壳Grb7 (Growth Factor Receptor Bound Protein 7) ELISA Kit  拉丁属名: Chaetomium globosum

乳杆菌属Grb10 (Growth Factor Receptor Bound Protein 10) ELISA Kit  拉丁属名: Lactobacillus  sp.

黄色篮状菌Grb14 (Growth Factor Receptor Bound Protein 14) ELISA Kit  拉丁属名: Talaromyces flavus

果生链核盘菌GH2 (Growth Hormone 2) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

浸麻类芽胞杆菌GHRH (Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit用途: 产酮、乙

草酸青霉CAM (Calmodulin) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium  oxalicum

黄曲霉HP (Haptoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  flavus

酿酒酵母HSF1 (Heat Shock Factor 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

肠杆菌HSP-20 (Heat Shock Protein 20) ELISA Kit用途: 微生物肥料
克柔念珠菌探针法荧光定量PCR试剂盒 HSP-90 Beta (heat sock protein-90 Beta)  热休克蛋白-90β （抗原）12,13-去氢苦参碱12,13-didehydromatridin-15-one化学标准品 分 子 式: C15H22N2O 分 子 量: 246.34798

IASPP(inhibitory member of the ASPP family)  细胞凋亡ASPP家族的另一个成员(抗原)澳洲茄胺solasodine中药标准品  分 子 式: C27H43NO2 分 子 量: 413.64

CD54/ICAM-1  细胞间粘附分子-1HEPES缓冲液(1×HMF,无镁)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

IL-1 Beta(Interleukin-1 Beta)  白介素1β（白细胞介素-1β）(多肽抗原)Tricine-SDS-PAGE凝胶配制试剂盒标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

IL1RAPL1 (Interleukin 1 receptor accessory protein-like 1)  白介素受体相关蛋白样1前体蛋白（抗原）蔗糖咪唑溶液(1.65mol/L,pH7.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

IL-6(Interleukin-6)  白介素6（白细胞介素-6）(多肽抗原)黄芪甲苷ASTRAGALOSIDE中药标准品  分 子 式: C41H68O14 分 子 量: 784.97

IL-10(Interleukin-10)  白介素10（白细胞介素-10）(抗原)柚皮素-7-O-葡萄糖醛酸苷Naringenin-7-O-glucuronide 中药标准品  分 子 式: C21H20O11 分 子 量: 448.3769