PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

镰孢霉FRS2 (Fibroblast Growth Factor Receptor Substrate 2) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

漏斗状侧耳（凤尾菇）FRS3 (Fibroblast Growth Factor Receptor SubstRate 3) ELISA Kit  拉丁属名: Pleurotus  sajor-caju

贝尔氏菌属FMOD (Fibromodulin) ELISA Kit  拉丁属名: Belliella  sp.

类黄假单胞菌FLRT2 (Fibronectin Leucine Rich Transmembrane Protein 2) ELISA Kit  拉丁属名: Pseudomonas synxantha

葡萄座腔菌FN (Fibronectin) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

粗糙脉孢菌FLNa (Filamin A) ELISA Kit  拉丁属名: Neurospora crassa

喜碱运动节杆菌Flt3 (FMS-like Tyrosine Kinase 3) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter  alkaliphilus

蜡样状芽孢杆菌FAK (Focal Adhesion Kinase) ELISA Kit   拉丁属名: Bacillus  cereus

猪放线杆菌FSH (follicle-stimulating hormone) ELISA Kit拉丁属名: Actinobacillus suis

膜醭毕赤酵母FST (Follistatin) ELISA Kit拉丁属名: Pichia membranifaciens

苏云金芽胞杆菌FOXP3 (Forkhead Box Protein P3) ELISA Kit   拉丁属名: Bacillus  thuringiensis

羊肚伴生菌FPR2 (Formyl Peptide Receptor 2) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄棕色链霉菌FK (Fractalkine) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces flavofuscus

德尔布有孢酵母GAD-Ab-IgM (Glutamic Acid Decarboxylase Autoantibody IgM)ELISA Kit拉丁属名: Torulaspora delbrueckii

乳杆菌F-TESTO (Free Testoterone) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
幽门弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Deltex-1  (DTX1) (Deltex protein 1)抗原梓苷，梓实糖苷b-D-Glucopyranoside,(1aS,1bS,2S,*R,6S,6aS)-1a,1b,2,*,6,6a-hexahydro-6-[(4-hydroxybenzoyl)oxy]-1a-(hydroxymethyl)oxireno[4,5]cyclopenta[1,2-c]pyran-2-yl对照药材 分 子 式: C22H26O12 分 子 量: 482.43464

DISC1(disrupted in schizophrenia1)(NT)  DISC1 N端抗原雷公藤内酯甲Wilforlide A中药标准品  分 子 式: C30H46O3 分 子 量: 454.68

DISC1(disrupted in schizophrenia1)(CT)  DISC1 C端抗原似梨木双黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷Ochnaflavone7-O-β-D-gluco-pyranoside中药标准品  分 子 式: C30H18O10 分 子 量: 538.45792

DR3/TRAMP (death receptor-3)  DR3 死亡受体（抗原）硫酸鱼精蛋白溶液(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

E7 protein/HPV 16 (Human papillomavirus type 16)  人病毒16型E7蛋白抗原知母皂苷CTimorsaponin C中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

EGF-R (Epidemal growth factor receptor)  表皮生长因子受体（抗原）糖精Benzo[d]isothiazol-3(2H)-one 1,1-dioxide化学标准品 分 子 式: C7H5NO3S 分 子 量: 183.1845

Eukaryotic aspartyl protease(Rice)  天冬氨酸蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一种)（抗原）盐酸吐根酚碱Cephaeline hydrochloride中药标准品  分 子 式: C28H40Cl2N2O4 分 子 量: 539.53