PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希氏杆菌CTACK (Cutaneous T-Cell Attracting Chemokine) ELISA Kit  拉丁属名: Escherichia  coli

海神弧菌β-CTx (Beta Crosslaps) ELISA Kit拉丁属名: Vibrio neptunius

谷氨酸棒杆菌CXCR3 (CXC-chemokine receptor 3) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

茯苓COL2 (Collagen Type Ⅱ) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

运动发酵单孢菌*CREB (Cyclic AMP Response Element Binding Protein) ELISA Kit  拉丁属名: Iymononas mobilis Kluyver Kluyver and Van Niel

短裙竹荪东北变种*c-myc (c-myc Oncogene Product) ELISA Kit拉丁属名: Dictyophora duplicata  var. northeastensis.

金黄壳囊孢CDK5 (Cyclin Dependent Kinase 5) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

乳酸杆菌CDK9 (Cyclin Dependent Kinase 9) ELISA Kit  拉丁属名: Lactobacillus sp.

长枝木霉CDKN1B (Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 1B) ELISA Kit   注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑平188CCND1 (Cyclin-D1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

浅灰绿色链霉菌CCND2 (Cyclin-D2) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces griseoviridans

白肉迷孔菌CCND3 (Cyclin-D3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

印度毛壳CYPA (Cyclophilin A) ELISA Kit 用途: 降解纤维素(degrades cellulose) 菌类抗性测定(fungus resistance testing )

烟管菌CYPB (Cyclophilin B) ELISA Kit  拉丁属名: Bjerkandera adusta

苹果链格孢（苹果斑点落叶病菌）CYPD (Cyclophilin D) ELISA Kit  用途: 用于拮抗菌筛选研究
骆驼痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Beta1-adrenergic receptor  肾上腺素能受体β1(抗原)β-胸苷Thymidine对照药材 分 子 式: C10H14N2O5 分 子 量: 242.22856

Annexin V  膜粘连蛋白-5(抗原)5-甲氧基铁屎米酮6H-Indolo[3,2,1-de][1,5]naphthyridin-6-one,5-methoxy-化学标准品 分 子 式: C15H10N2O2 分 子 量:

AQP4(aquaporin Protein-4)  水通道蛋白-4（抗原）NP-40溶液(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

B7-H4  B7-H4（抗原）松苓新酸3β-Hydroxy-5α-lanosta-7,9(11),24-trien-21-oic acid中药标准品  分 子 式: C30H46O3 分 子 量: 454.68444

BADH2 (Betaine-aldehyde dehydrogenase )  BADH2抗原甲基异石榴皮碱2-Propanone,1-(1-methyl-2-piperidinyl)-对照药材 分 子 式: C9H17NO 分 子 量: 155.23738

BGP(Bone Gla-protein)  骨钙素(抗原)法卡林二醇Heptadeca-1,9-dien-4,6-diyne-3,8-diol中药标准品  分 子 式: C17H24O2 分 子 量: 260.37126

BK channel (stretch-activated Kca channel)  BK通道蛋白(抗原)白术内酯ⅠAtractylenolide-1中药标准品  分 子 式: C15H18O2 分 子 量: 230.30