PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

灰色笋壳菌CKLFSF7 (Chemokine Like Factor Superfamily 7) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

疣梗青霉CKLFSF8 (Chemokine Like Factor Superfamily 8) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium verrucosum

分散泛菌CCKAR (Cholecystokinin A Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Pantoea dispersa

岛篮状菌CCKBR (Cholecystokinin B Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Talaromyces  islandicus

球毛壳菌CETP (cholest erolester transfer protein) ELISA Kit拉丁属名: Chaetomium globosum Kunze

小孢根霉PC/CPG (choline phosphoglyceride) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus microsporus

人参土成对杆菌Gas6 (Growth Arrest Specific Protein 6) ELISA Kit拉丁属名: Dyadobacter ginsengisoli

假单胞菌属CS (chondroitin sulfate) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas  sp

更新世肉杆菌CG (Chorionic Gonadotrophin) ELISA Kit拉丁属名: Carnobacterium pleistocenium

奈瑟菌CBX3 (Chromobox Homolog 3) ELISA Kit 拉丁属名: Neisseria gonorrhoeae

海南油脂酵母CHD3 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 3) ELISA Kit 拉丁属名: Lipomyces hainanensis

大肠埃希氏菌CHD5 (Chromodomain Helicase DNA Binding Protein 5) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

哈茨木霉CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

热脱氮地芽孢杆菌热脱氮亚种CROP (Cisplatin Resistance Associated Overexpressed Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Geobacillus thermodenitrificans subsp. thermodenitrificans

茯苓C-jun ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
羊仰口线虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2)  受体相关因子2抗原王不留行黄酮苷Vaccarin中药标准品  分 子 式: C32H38O19 分 子 量: 726.63272

TRAF3/CD40bp (CD40 binding protein)  受体相关蛋白3抗原多聚甲醛溶液(1% PFA)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

TRAF6 (TNF receptor-associated factor 6)  受体相关因子6抗原升麻酮醇 3-O-alpha-L-拉伯糖苷a-L-Arabinopyranoside, (3b,15a,16a,23R,24S)-16,23:16,24-diepoxy-15,25-dihydroxy-9,19-cyclolanostan-3-yl化学标准品 分 子 式: C35H56O9 分 子 量: 620.81374

TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)  相关凋亡诱导配体/凋亡素2配体抗原蜕皮激素Hydroxyecdysone中药标准品  分 子 式: C27H44O7 分 子 量: 480.64

TRBF1 (Telomeric repeat binding factor 1)  端粒体复制结合因子1抗原磺胺甲噁唑4-Amino-N-(5-methylisoxazol-3-yl)benzenesulfonamide化学标准品 分 子 式: C10H11N3O3S 分 子 量: 253.27764

TRIM32(tripartite motif protein 32)  TRIM32抗原苦参醇X化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

Trop-2/Tpm2 peptide  原肌球蛋白抗原乙酰乌头碱Acetylaconitine化学标准品 分 子 式: C36H49NO12 分 子 量: 687.77