PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

氧化节杆菌IL-11 (Interleukin 11) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter oxydans

猴头sdLDL (Small Dense Low Density Lipoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

马克斯克鲁维酵母hs-CRP (high-sensitivity C-reactive protein) ELISA Kit拉丁属名: Kluyveromyces  marxianus

出芽短梗霉TSHR (Thyroid Stimulating Hormone Receptor) ELISA Kit 拉丁属名: Aureobasidium pullulans

聚生壳菌Lactoferrin (LTF) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

球孢白僵菌TERF2IP (Telomeric Repeat Binding Factor 2 Interacting Protein) ELISA Kit拉丁属名: Beauveria bassiana

酿酒酵母FNDC5 (Fibronectin Type III Domain Containing Protein 5 ) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

根瘤菌Anti-dsDNA (Anti-Double Stranded DNA Antibody) ELISA Kit用途: 固氮

松口蘑DBT (Dihydrolipoamide branched chain transacylase E2) ELISA kit拉丁属名: Tricholoma matsutake

斑玉蕈AD (Adropin) ELISA kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酱油曲霉Salusin β (Salusin Beta) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  sojae

酿酒酵母ENG (Soluble Endoglin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

虾苗杀虾微杆菌c-MET/HGFR (hepatocyte growth factor receptor) ELISA Kit拉丁属名: Microbacterium shrimpcida

果生链核盘菌RECK (Reversion-inducing-cysteine-rich protein with kazal motifs) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

根瘤菌CD44v5 (cluster of differentiation 44 variant 5)ELISA Kit用途: 固氮
牛病毒探针法荧光定量PCR试剂盒说明书PCX/PODXL(Podocalyxin)  足细胞特异蛋白抗原1-氧-乙酰旋覆花内酯1-O-acetyl Britannilactone中药标准品  分 子 式: C17H24O5 分 子 量: 308.36946

PDGF-BB peptide  血小板源性生长因子-BB抗原人参皂苷F2Ginsenoside F2中药标准品  分 子 式: C42H72O13 分 子 量: 785.01328

Pdx1(pancreatic and duodenal homeobox 1)  胰十二指肠同源异型盒基因抗原紫杉脂素( )-Taxiresinol; Taxiresinol化学标准品 分 子 式: C19H22O6 分 子 量: 346.37438

pectinesterase inhibitor 18 peptide  果胶酶抗原6-姜烯酚6-Shogaol中药标准品  分 子 式: C17H24O3 分 子 量: 276.37

PEG10(Paternally expressed gene 10)  高表达基因抗原黄苷-5'-单磷酸钠5'-Xanthylic acid,disodium salt (8CI,9CI)化学标准品 分 子 式: C10H11N4Na2O9P 分 子 量:

PENK/Enkephalin A(Preproencephalin A)  脑啡肽灵芝烯酸DGanoderenic acid D中药标准品  分 子 式: C30H40O7 分 子 量: 512.6344

PEPT2 (Peptide-transporters 2)  肠道肽转运蛋白2/小肽转运蛋白2抗原L-赖氨酸盐酸盐L-Lysine hydrochloride化学标准品 分 子 式: C6H14N2O2.HCl 分 子 量: 182.6485