PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

木糖葡糖酸醋杆菌DHEA-S (Dehydroepiandrosterone sulfate) ELISA Kit拉丁属名: Gluconacetobacter xylinus

植物乳杆菌DHEA (Dehydroepiandrosterone) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

枯草芽孢杆菌DPD (Deoxypyridinoline) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

黄曲霉DNASE1 (Deoxyribonuclease I) ELISA Kit  拉丁属名: Aspergillus  flavus

罗伊氏乳杆菌VAP-1 (Vascular Adhesion Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  reuteri

铜绿假单胞菌Des (Desmin) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  aeruginosa

酿酒酵母DAO (Diamine Oxidase) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

白姬松茸H3 (Histone H3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

橙鳞伞DKK2 (Dickkopf Related Protein 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母DLD (Dihydrolipoyl Dehydrogenase) ELISA Kit  拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

蟋蟀草平脐蠕孢DLAT (Dihydrolipoyl Transacetylase) ELISA Kit  注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

细极链格孢DPPIV (dipeptidyl peptldase IV) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

秦氏蜜环菌D-LDH (D-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产紫青霉D1R (Dopamine D1 receptor) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium purpurogenum

香菇DRD3 (Dopamine Receptor D3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
大肠弯曲杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格CD3 epsilon peptide  CD3 epsilon(抗原)贝萼皂苷元甲酯Arjunolsaeure-methylester化学标准品 分 子 式: C31H50O5 分 子 量: 502.726

CD4  CD4(抗原)龙牙楤木皂甙VIIOlean-12-en-28-oicacid, 3-[(O-b-D-glucopyranosyl-(1®3)-O-[b-D-xylopyranosyl-(1®2)]-a-L-arabinopyranosyl)oxy]-, b-D-glucopyranosyl ester, (3b)-化学标准品 分 子 式: C52H84O21 分 子 量: 1045.21076

CD4(Rabbit Anti-Human Mouse rat CD4 Palyclonal Anti-body)  CD4抗原阔叶酮醇Platyphyllonol对照药材 分 子 式: C24H30O8 分 子 量: 446.4902

CD8  CD8抗原牡荆素-4''-O-葡萄糖苷Vitexin -4''-O-glucoside化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

CD20(抗原)  CD20（抗原）溴酚蓝蔗糖溶液(0.25%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CD25/IL-2RA(Imterleukm-2 Receptor alpha)  CD25/白介素2-受体(抗原)PAGE连续凝胶电泳缓冲液(2×,pH8.9)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CD31(PECAM-1)  血小板内皮细胞黏附分子-1（抗原）芝麻酚Sesamol中药标准品  分 子 式: C7H6O3 分 子 量: 138.12