PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

黄曲霉FVIII (Coagulation Factor VIII) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus flavus

冬菇FIX (Coagulation Factor IX) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

屎肠球菌FX (coagulation factor X) ELISA Kit拉丁属名: Enterococcus faecium

短小芽孢杆菌 更名不慌供应FXII (Coagulation Factor XII) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  pumilus

绒边胶盘孢F13B (Coagulation Factor XIII B Polypeptide) ELISA Kit 拉丁属名: Hainesia lythri

大豆拟茎点种腐病菌CFL1 (Cofilin 1, Non-Muscle) ELISA Kit 拉丁属名: Phomopsis  longicolla Hobbs

杏鲍菇CFL2 (Cofilin 2, Muscle) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

肺形侧耳COL2 (Collagen Type II) ELISA Kit拉丁属名: Pleurotus pulmonarius

大肠埃希氏菌COL3 (Collagen Type III) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

枯草芽孢杆菌COL4 (Collagen Type IV) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

枯草芽孢杆菌COL1α2 (Collagen Type I Alpha 2) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

小红酵母COL4α1 (Collagen Type IV Alpha 1) ELISA Kit 拉丁属名: Rhodotorula minuta

枯草芽孢杆菌COL10 (Collagen Type X) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

球形节杆菌Collagenase I ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter globiformis

米曲霉Collagenase II ELISA Kit用途: 酱油 菌
鼻疽伯克霍尔德氏菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商TTF-1 (Thyroid Transcription Factor-1)  甲状腺核转录因子-1抗原(E)-阿魏酸二十六盐Hexacosyl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate对照药材 分 子 式: C36H62O4 分 子 量: 558.87508

Tubulin- Gamma  微管蛋白-γ抗原桑根酮醇 LSanggenol L化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

TWIST protein peptide  TWIST蛋白抗原麦冬皂苷Ab-D-Galactopyranoside, (1b,3b,25R)-3-hydroxyspirost-5-en-1-yl2-O-(3-O-acetyl-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl)-6-deoxy-中药标准品  分 子 式: C41H64O13 分 子 量: 764.93906

T Beta10 peptide  胸腺素β10抗原异补骨脂素2H-Furo[2,3-h]chromen-2-one中药标准品  分 子 式: C11H6O3 分 子 量: 186.16354

UCN(Urocortin)mouse ret  新型活性因子UCN抗原(小鼠、大鼠)人参皂苷CK20(S)-Ginsenoside Ck中药标准品  分 子 式: C36H62O8 分 子 量: 622.87268

USF-1(upstream stimulatory factor 1)  上游刺激因子1抗原石杉碱乙Huperzine B中药标准品  分 子 式: C16H20N2O 分 子 量: 256.3428

Ubiquitin  泛素蛋白Millonig缓冲福尔马林(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: